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文献和实验干品即可,泡发时间视植物泡发状态而定。 5)提取试剂盒推荐:宇玫博 UR5222 植物囊泡提取纯化试剂盒(干品植物)。 5. 其他大型真菌:如灵芝等。 1)尽量选择新鲜的待提取真菌; 2)推荐榨汁机:电动碾磨榨汁机; 3)大型真菌质量参考:20 g 左右大型真菌,榨汁打碎后取碎渣,加 40~50 mL PBS 后,再按推荐试剂盒处理后浓缩 100 倍,得到 400 μL 左右植物囊泡。 4)处理: ① 大型真菌需要洗净后尽可能切小片榨汁; ② 大型真菌榨汁后几乎不产生汁液,需要通过榨汁步骤
。 图 1. 富集质膜组分后检测跨膜蛋白更易检出:目的蛋白 SGL1 是跨膜蛋白,使用总膜蛋白检测困难,使用柱式法质膜及细胞组分分离试剂盒富集质膜后再检测质膜组分,可以显著提高 SGL1 的检出效率。 (图片来源:Kashiwagi Y,2015,PLoS ONE 10(6):e0130605. doi:10.1371/journal.pone.0130605.) (3)有条件诱导目的蛋白表达 如果通过增溶目的蛋白或分离亚细胞结构富集目的蛋白,仍无法得到 WB 条带,可通过查阅相关
在 RIPA 不可溶组分中,如果样品又是研磨困难的组织样品,则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上(内质网,高尔基体,溶酶体,线粒体,内体等)表达,且蛋白表达量较低,若用总蛋白检测时条带较弱,则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测,提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程,推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离,将样品分离为不同组分如分成细胞核,细胞浆,细胞
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