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文献和实验,可以帮助去掉一些无法降解的组织,比如纤维和杂质之类,然后取上清再加入氯仿,可以帮助提高氯仿的效率。然后就是在加入 Trizol 后,可以将裂解液放到-80 冻存半小时以上,据说冻融过程中可以再次帮助更加充分的裂解细胞,分离蛋白和 RNA。我试了一下,的确有效果。 7. 关于个步骤的时间: 标准的时间是: a. 液氮研磨(没时间要求,只要组织不化就好, 我一般一个组织十分钟左右,女孩子可能时间长一些,毕竟体力活) b. 加入 Trizol 裂解 5-10 分钟(我觉得还是 10 分钟比较
的玩笑”。 研究miRNA的新工具 随着小分子RNA日益收受到研究人员的重视,很多研究小分子RNA的新方法不断推出。 分子RNA的分离 由于小分子RNA可能参与分化、发育、组织生长、脂肪代谢等生理过程,在不同的组织和发育阶段的表达水平有所不同,进一步了解小分子RNA的生物功能需要确定其在各种生物样品中的表达水平,因而需要一种精确的定量纯化方法,从而得到可信的数据。 现行的RNA纯化方法包括有机溶剂抽提+乙醇沉淀,或者是采用更加方便快捷的硅胶膜离心柱的方法来纯化RNA。由于硅胶膜离心柱通常只富集较大
哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解,以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。一、实验材料:Trizol试剂(Invitrogen公司)研钵,匀浆器,镊子,铝箔都高温灭菌即可;二、具体过程:1、样品在离体后应迅速冷冻在液氮中,若是比较大块的组织,要尽量把组织剪切成黄豆大小的块,使液氮迅速渗透到组织内部而防止组织内部的RNA降解。组织用铝箔包好或放入冻存管中,并做好记号,注意不要把记号写在纸上,以防纸被组织的血水渗透
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