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MC38/内皮细胞培养基/细胞
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细胞系
100万
结肠癌
-
半贴壁半悬浮细胞
长期
冻存/复苏
肠
上皮样
否
小鼠
MC-38
赛百慷
T25
MC38 小鼠结肠癌细胞细胞介绍
结肠癌;雌性;C57BL/6。
细胞特性
1) 来源:结肠癌
2) 形态:上皮样,半贴壁半悬浮细胞
3) 含量:>1x106
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备 DMEM 基础培养基 (iCell-0001) 85%
优质胎牛血清 (iCell-0500) 10%
MEM NEAA非必需氨基酸 (iCell-01000) 1%
Sodium Pyruvate丙tong酸钠 (iCell-01100) 1%
GlutaMAX-1谷氨酰胺 (iCell-0900) 1%
HEPES (iCell-01200) 1%
P/S青霉素-链霉素 (iCell-15140-122) 1%
1) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
2) 冻存细胞:冻存细胞时,用FBS重悬细胞,然后加入一定量的DMSO,轻轻混合均匀后移入到冻存管中,DMSO终浓度为10%。
该细胞为轻微贴壁和悬浮培养的细胞,传代可以参考以下方法:
1. 收集:将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
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565 人阅读发布时间:2018-08-23 14:35
484 人阅读发布时间:2018-08-23 14:35
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