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- 多肽质量指纹图谱（PMF）
- 2025年07月16日
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多肽质量指纹图谱（PMF）
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基云（上海）生物技术有限公司
蛋白质被酶切位点专一的蛋白酶水解后所得的全部肽段的质量图谱称为肽质量指纹图谱。不同蛋白质有不同的氨基酸序列（一级结构），被酶水解后产生的肽段序列不同，同一蛋白质在被不同的蛋白酶裂解后，产生的肽段也不相同。因此，酶切后的肽混合物的质谱具有一定的特异性，故称为指纹图谱。
肽质量指纹图谱实现了生物质谱鉴定电泳分离后凝胶上蛋白质的重要突破，而且能进行高通量分析，灵敏度高。
应用领域
生物样本、保健品等蛋白样品
实验流程
送样须知
蛋白质总量：>5μg，浓度>0.1μg/μl；缓冲液不含去污剂NP40、Triton X-100等
SDS-PAGE条带：考染、银染（质谱兼容）条带清晰可见
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基云（上海）生物技术有限公司
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文献和实验凝胶的染色（见第 16 章和第 17 章），因此适合于通过 MS 进行蛋白质鉴定。然而，整个蛋白质的 MS 不等于蛋白质的直接鉴定。要达到灵敏度高、准确度好并能访问大部分数据（ 覆盖序列），蛋白质必须由内切蛋白酶（endoprotease) 消化产生多种蛋白质的特定片段。如果内切蛋白酶有足够的特异性、数据库中有蛋白质的信息，则通过对实验样品肽质量（由内切蛋白酶消化产生、通过 MALDI-TOF 质谱检测）与数据库中所有蛋白质硅片消化的肽质量的推断比较，就能对候选蛋白质进行鉴定。 植物蛋白质组学使用
基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
MALDI-TOF-MS最初用于等分试样（1μL或更少）样品的质谱鉴定，用于检查肽的纯度或PMF。大批量的样品测定，往往使用Edman降解法测序或ESI-MS，如四极（Q）-TOF-MS 质谱。做出以上选择的原因，主要是因为MALDI技术进行分析，上样量不能超过0.5μL。这种样品制备方法极大地限制了MALDI技术检测的整体灵敏度，并且还限制了可以分析的肽浓度，因为肽和基质共结晶过程的质量对于检测的灵敏度和准确性都非常重要。MALDI技术通常将等体积的样品和MALDI基质溶液混合，将肽混合
(1975)和Klose(1975)等人独立开发的。已经证明，对于毫克到微克的样品量，这项技术可以在一次分析中分离多达10 000条的肽。蛋白质首先变性，然后进行称为等电聚焦(iso electro focusing，IEF)的第一个分离步骤，根据这些蛋白质的等电点(pI)可以分离这些蛋白质。简单地描述就是，在pH梯度胶上的蛋白质会聚焦在pH对应于净零电荷的位置。然后将等电聚焦的凝胶放在二维的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上，根据蛋白质的相对分子质量进行电泳分离(Lammli
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