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- QY-H11707
- 2025年07月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
10000
- 供应商：
齐一生物科技（上海）有限公司
- 检测范围：
详细请见说明书
- 检测方法：
ELISA酶联免疫法
- 应用：
科研检测
- 样本：
血清，血浆，尿液，胸腹水，脑脊液，细胞培养上清，组织匀浆等
- 规格：
48T/96T
本试剂盒库存：现货
试剂盒保存条件：2-8℃
试剂盒使用范围：仅供科研检测,不得用于临床.
试剂盒发货方式：专门快递免费送货上门
产品价格：价格优惠,欢迎来电洽谈！
试剂盒使用说明书:说明书随货发送,您也可以直接联系我公司在线销售人员索取.全国热线：400-991-0197代理多种品牌进口原装、“ELISA试剂盒”.齐一生物科技有限公司作为酶联免疫供应商,凭借精湛的技术,全方位的售前售后免费代测提供技术服务,共同铸就高品质的产品.多年专业酶免服务,质量保证,可免费提供代测服务,一周内出结果.欢迎来电咨询订购！
酶联免疫吸附实验材料,试剂,溶液
1．酶标板,100μltip头,1mlEp管,湿盒
2．包被稀释液（0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠buffer,pH9.6）
碳酸钠0.15g,碳酸氢钠0.29g,叠氮钠0.02g,加双蒸水至100ml,调至pH9.6
3.封闭液(5%小牛血清/PBS溶液)
小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml
4.洗涤液(PBST,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH7.4
5.样本稀释液(PBS,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH7.4
6.酶标第2抗体(羊抗兔)稀释范围1:5,000-1:100,000
7.底物液(TMB-过氧化氢尿素溶液)
①底物液A:TMB20mg,无水乙醇10ml,加双蒸水至100ml.
②底物液B(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸二氢钠缓冲液,pH5.0-5.4)
Na2HPO41.46g,柠檬酸0.933g,0.75%过氧化氢尿素0.64ml,加三蒸水至100ml,调至pH5.0-5.4
③底物A和B按1:1混合即成TMB-过氧化氢尿素溶液.
8.终止液(2mol/LH2SO4溶液)双蒸水200ml,浓硫酸34ml,(缓慢滴加并不断搅拌),加双蒸水至300ml9.0.9%生理盐水
操作步骤:
1.包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):
将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)
2.封闭酶标反应孔:
5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
洗涤方法:吸干孔内反应液,将洗涤液注满板孔,放置2min略作摇动,吸干孔内液,倾去液体后在吸水纸上拍干
洗涤次数3次
3.加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):
检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl.
将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
4.加入酶标抗体:
酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行.37℃,30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前.
5.加入底物液(现用现配):
TMB-过氧化氢尿素溶液,OPD-过氧化氢底物液系统次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟,加入终止液显色.
6.终止反应:
每孔加入终止液50μl终止反应,于20min内测定实验结果.
7.结果判断:
OPD显色后采用492nm波长,TMB反应产物检测需要450nm波长.检测时一定要首先进行空白孔系统调零.用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示,当P/N大于2时作为抗体的效价.(数值的大小依具体检测要求而定.)
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文献和实验循环免疫复合物（CIC）的检测方法大致可分为两类，即抗原特异性方法和抗原非特异性方法。前者通过区别游离的抗原和与抗体结合的抗原，选择性测定含有某种特定抗原的IC。在已知由某种抗原引起的免疫病理反应的疾病中，可应用此类方法。抗原非特异方法，则不考虑形成IC抗原的性质，根据免疫球蛋白分子在结合抗原以后发生的物理学和生物学特性的改变进行检测。由于体内形成的CIC可能涉及多种抗原—抗体系统。所以临床上多采用此法。其检测方法种类繁多。大致可归纳为：1、物理方法 根据IC分子量大小，表面电荷和溶解度等特性
免疫复合物增多，病情活动，但是对诊断没有特异性价值。2、冷球蛋白测定亦可称冷免疫球蛋白，是在低温自然沉淀，加热后又能溶解的蛋白复合物。当血液中出现冷球蛋白时，称冷球蛋白血症，在红斑狼疮病人中较多见。有时见两小腿部皮下紫癜，而血小板检查正常，这是由于冷球蛋白在皮下沉淀的结果，该方法对判断病情变化和指导治疗有参考价值。二、相关问题1、问：“红细胞免疫黏附，清除体内CIC”中的“CIC”是什么意思？答：循环免疫复合物（Circulationimmunecomplex，CIC）又称可溶性免疫复合物，分子
免疫复合物在体内存在有两种方式，一是存在于血液中的循环免疫复合物（CIC），一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。 一、循环免疫复合物的检测 根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性，已经设计出很多检测CIC的方法（表24-4），本章只述及常用的代表性方法。 表24
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