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人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA试剂盒

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  • 上海
  • QY-H11175
  • 2025年07月16日
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      362

    • 供应商

      齐一生物科技(上海)有限公司

    • 检测范围

      详细请见说明书

    • 检测方法

      ELISA酶联免疫法

    • 应用

      科研检测

    • 标记物

      见说明

    • 样本

      血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清,组织匀浆等

    • 规格

      48T/96T

    人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA试剂盒齐一生物科技(上海)有限公司检测试剂盒产品已被广泛应用于化学,化工,生命科学的基础研究和开发应用,制药,疾病诊断与控制,人口与健康,生物技术等诸多领域.客户遍布国内各大学,研究所,医院,卫生防疫,商品检验检疫,制药公司,生物技术公司和食品工业等单位.齐一生物科技(上海)有限公司客服热线:400-991-0197网址:www.qiyibio.com

    ELISA试剂盒操作步骤
    ELISA试剂盒使用前,将所有试剂充分混匀.不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差.
    根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数.每个标准品和空白孔建议做复孔.每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔.标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内.
    加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内.立即加入50ul的生物素标记的抗体.盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时.
    甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次.
    每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟.
    甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次.
    每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟.避免光照.
    取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果.
    在450nm波长处测定各孔的OD值.
    ELISA操作步骤
    酶联免疫吸附实验材料,试剂,溶液
    1.酶标板,100μltip头,1mlEp管,湿盒
    2.包被稀释液(0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠buffer,pH9.6)
    碳酸钠0.15g,碳酸氢钠0.29g,叠氮钠0.02g,加双蒸水至100ml,调至pH9.6
    3.封闭液(5%小牛血清/PBS溶液)
    小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml
    4.洗涤液(PBST,pH7.4)
    NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH7.4
    5.样本稀释液(PBS,pH7.4)
    NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH7.4
    6.酶标第2抗体(羊抗兔)稀释范围1:5,000-1:100,000
    7.底物液(TMB-过氧化氢尿素溶液)
    ①底物液A:TMB20mg,无水乙醇10ml,加双蒸水至100ml.
    ②底物液B(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸二氢钠缓冲液,pH5.0-5.4)
    Na2HPO41.46g,柠檬酸0.933g,0.75%过氧化氢尿素0.64ml,加三蒸水至100ml,调至pH5.0-5.4
    ③底物A和B按1:1混合即成TMB-过氧化氢尿素溶液.
    8.终止液(2mol/LH2SO4溶液)双蒸水200ml,浓硫酸34ml,(缓慢滴加并不断搅拌),加双蒸水至300ml9.0.9%生理盐水

    人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA试剂盒操作步骤:
    1.包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):
    将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)
    2.封闭酶标反应孔:
    5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
    洗涤方法:吸干孔内反应液,将洗涤液注满板孔,放置2min略作摇动,吸干孔内液,倾去液体后在吸水纸上拍干
    洗涤次数3次
    3.加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):
    检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl.
    将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
    4.加入酶标抗体:
    酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行.37℃,30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前.
    5.加入底物液(现用现配):
    TMB-过氧化氢尿素溶液,OPD-过氧化氢底物液系统次之.
    底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟,加入终止液显色.
    6.终止反应:
    每孔加入终止液50μl终止反应,于20min内测定实验结果.
    7.结果判断:
    OPD显色后采用492nm波长,TMB反应产物检测需要450nm波长.检测时一定要首先进行空白孔系统调零.用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示,当P/N大于2时作为抗体的效价.(数值的大小依具体检测要求而定.)
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