人激肽释放酶10（HK10）ELISA试剂盒

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特点
一、高效、灵敏、特异的抗体；
二、稳定的重复性和可靠性；
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体；
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；
五、节省实验经费.
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度.比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为99%.
制备方法
人激肽释放酶10（HK10）ELISA试剂盒包括以下步骤：
1)抗原表位的计算机筛选；
2)抗原的制备；
3)血清的采集；
4)间接ELISA方法的建立；
5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证；
6)试剂盒的稳定性验证；
7)对屠宰场进行临床检测.该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好.应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒,适用于大批量发病样本的检测,可用于猪戊肝的快速诊断,并预防、控制猪戊肝病毒的流行和阻断戊肝病毒由猪向人传播.
组成结构
1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激.使用不含热原和内毒素的试管.收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离.
2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测.1000×g离心30分钟去除颗粒.
3、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物.
4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎.1000×g离心10分钟,取上清液.
5、保存：如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻.尽可能的不要使用溶血或高血脂血.如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤.不要在37℃或更高的温度加热解冻.应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻.
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中产品定量检测试剂盒成分
1预包被板:抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化96T
2酶标记抗体:(30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化0.4mLx1
3标准品:重组小鼠白介素-60.5mLx2
4EIA缓冲液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS30mLx1
5标记抗体稀释液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS12mLx1
6显色剂:TMB底物液15mLx1
7终止液:1N硫酸12mLx1
8浓缩洗涤液:(40倍浓缩)含1%BSA,0.05%吐温20BPS50mLx1操作说明1实验所需器材(但试剂盒没有提供)酶标仪(450nm)微移液管及其吸嘴量筒及烧杯去离子水冰箱(4°C)坐标纸(log/log)吸水纸试管(用于标准品稀释)温育箱(37°C±1°C)洗瓶(用于洗板)一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
操作方法
双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml.在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃隔夜.次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟.（简称洗涤,下同）.
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时.然后洗涤.（同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔）.
3. 加酶标抗体：于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml.37℃孵育0.5～1小时,洗涤.
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10～30分钟.
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml.
6. 结果判定：可于白色背景上,直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示.也可测OD值：在ELISA检测仪上,于450nm（若以ABTS显色,则410nm）处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性.
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃隔夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤；
6.’最后一遍用DDW洗涤.
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6.
发展前景
临床测定技术的发展主要在于方法学的发展,而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用.分子生物学正在并最终肯定会让对整个生命科学有一个全面而彻底的认识,其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的,对以前一些难以检测的生物活性物质的测定,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性.
应用领域
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断.也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点.不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查.本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法.因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,
可概括四个方面：
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位.
2、研究抗酶抗体的合成.
3、显现微量的免疫沉淀反应.
4、定量检测体液中抗原或抗体成份.
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