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文献和实验-17AC CO2 培养箱 SANYOXTD-10A体视显微镜 芜湖光学仪器厂无菌超净工作台 苏州净化设备厂50ml 细胞培养瓶 NUNC96孔细胞培养板 NUNC24孔细胞培养板 NUNC6 孔细胞培养板 NUNC倒置显微镜 LeicaOLYMPUS荧光显微镜 OLYMPUSOLYMPUS光学显微镜 OLYMPUS方法: 神经干细胞的培养 ①原代细胞的培养:取孕13.5天昆明种二级孕小鼠,引臼脱颈处死,碘酒、乙醇消毒腹部,逐层剖开腹部皮肤、肌肉、腹膜,取出子宫,放入盛有D1
/F12(Gibco)、磷酸盐缓冲盐水(PBS;Gibco)、Krebs-Ringer缓冲液。 ③筛网:70μm尼龙细胞筛网(Falcon)。 ④组织培养板:6孔或24孔板(Corning),需要悬浮培养时使用超低吸附板。 ⑤基质胶:生长因子减少型基质胶(Corning)、培养因子混合物。 ⑥其他用品:无菌移液器吸头、离心管、用于处理粘性试剂的低吸附移液器吸头,以及用于活力评估的细胞计数板或自动细胞计数器。 2.方法 a)组织取样和储存:从供体器官、组织切除或活检中收集肝脏组织样本,置于无菌PBS/DMEM
,不要用4%多聚甲醛,以免抗原交联,这样组化时不用再抗原修复。细胞固定后可室温保存在丙酮中,不使之干燥。29. 如果是检测膜上的物质,好象不能用酒精。30. 适当密度后取出固定(丙酮-20固定10~20 min),再进行免疫染色。31. 一批细胞爬片,如果细胞爬片是在玻璃上,冷丙酮固定15-20分钟,然后放-20度,没有问题。如果细胞爬片是在24孔板或6孔板里进行,冷丙酮会腐蚀板子,最好4%多聚甲醛。32. 细胞爬片用纯丙酮固定10分钟,取出干燥后用锡纸包裹,-70度保存。33. 4%多聚
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