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- YM-KJ1324
- 2025年08月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
远慕生物
- 检测范围：
科研实验
- 检测方法：
双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)
- 样本：
血液、尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等
- 规格：
96T/48T
人孤腓肽(OFQ/N)ELISA试剂盒说明书
上海远慕生物长期提供：ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、抗体、抗原、标准品等，价格实惠，质量有保证,信誉第一，竭诚欢迎新老客户咨询洽谈业务！
Human orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit
产品货号：YM-KJ1324
规格：96T/48T
欢迎来电咨询订购：Elisa试剂盒，人孤腓肽(OFQ/N)ELISA检测试剂盒
【实验准备】：
1. ELISA试剂盒及待测样本
2. 酶标仪(450nm波长滤光片)
3. 高精度移液器，EP管及一次性吸头
4. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
【标本要求】：
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 .
8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
【操作步骤】：
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍（48T 的20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【计算结果】：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
人孤腓肽(OFQ/N)ELISA试剂盒试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
0.2IU/L - 6IU/L
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文献和实验(positive)，而是病人（patient）的缩写，不应误解。为避免混淆，更宜用 S/N 表示。在早期的间接法 ELISA 中，有些作者定出 S/N 为阳性标准，现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的 S/N 的阈值。更应注意的是，N 所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底低得多。因此，这类试剂盒规，如 N (2) 竞争法 在竞争法 ELISA 中，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性
是在多个时间点连续测定产物生成量或底物消耗量，选取线性期的速率来计算酶活性，又称速率法。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L，取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育，延滞期为t0 min，测定时间间隔为t1 min，读数次数为n，每间隔时间吸光度变化平均值为A1，该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得)，比色皿光径为b cm。反应速度分别用产物的生成速度和样品中酶的催化能力来表示：
ELISA原理与实验方法The advantages of the ELISA are similar to other antibody-labeled reactions which include specificity, sensitivity, inexpensiveness, and safety. Since the enzyme label is the critical portion of ELISA, its selection is very important
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