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- YM-KJ0144
- 2025年08月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
远慕生物
- 检测范围：
科研实验
- 检测方法：
双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)
- 样本：
血液、尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等
- 规格：
96T/48T
人TATA盒结合蛋白/TBP相关因子(TAF)ELISA试剂盒说明书
上海远慕生物长期提供：ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、抗体、抗原、标准品等，价格实惠，质量有保证,信誉第一，竭诚欢迎新老客户咨询洽谈业务！
Human TATA box binding protein/TBP-associated factors,TAF ELISA Kit
产品货号：YM-KJ0144
规格：96T/48T
欢迎来电咨询订购：Elisa试剂盒，人TATA盒结合蛋白/TBP相关因子(TAF)ELISA检测试剂盒
【实验准备】：
1. ELISA试剂盒及待测样本
2. 酶标仪(450nm波长滤光片)
3. 高精度移液器，EP管及一次性吸头
4. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
【标本要求】：
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 .
8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
【操作步骤】：
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍（48T 的20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【计算结果】：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
人TATA盒结合蛋白/TBP相关因子(TAF)ELISA试剂盒试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
0.2IU/L - 6IU/L
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文献和实验：P300／CBP(CREB―结合蛋白)为含有2 400个氨基酸残基的大蛋白质分子。CBP和P300的序列相似，功能类似，如结合DNA、结合转录因子和病毒转化因子等，因此把它们称作P300／CBP。它们不仅募集PCAF对靶蛋白进行乙酰化，本身也具有HAT活性。P300／CBP是多种不同转录因子的辅助激活因子。 (3)TAF250：TAF是TATA盒结合蛋白(TBP)相关因子(TBP―associatedfactors)，它作为转录因子复合物TFIID的一部分发挥作用。 (4)核受体共激活
能识别TATA盒并与其结合的转录因子，是三种RNA聚合酶转录时都需要的；其他称为TBP相关因子(TBP�associated factors TAF)，至少包括8种能与TBP紧密结合的因子。转录前先是TFⅡ－D与TATA盒结合；继而TFⅡ－B以其C端与TBP－DNA复合体结合，其N端则能与RNA聚合酶Ⅱ亲和结合，接着由两个亚基组成的TFⅡ－F加入装配，TFⅡ－F能与RNA聚合酶形成复合体，还具有依赖于ATP供给能量的DNA解旋酶活性，能解开前方的DNA双螺旋，在转录链延伸中起作用。这样，启动子序列
。TFIID由几个蛋白组成，而其中的TATA区域结合蛋白（TBP），参与TATA序列的结合。TFIID的其他的蛋白组分被称为TBP-相关因子（TAFs）。用TFIID探针寡核苷酸和HeLa细胞核抽提物，可得到一个微弱的凝胶迁移带，但很难确定为是TFIID序列特异凝胶迁移复合物。纯化的重组的TBP很难作凝胶迁移实验，这部分是由于TBP存在很强的正电荷，导致TBP/DNA复合物很难进入凝胶。纯化的TBP形成二聚体后不能结合DNA（17）。因此形成的二聚体可参与DNA结合。TFIIB不单独与DNA结合
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