胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒

胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒

                                         微量法 100T/96S

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：                           

胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消hua酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。

 

测定原理：

胰蛋白酶催hua水解TAME的酯键，释放出的游离羧基与反应体系中的氢氧hua钠发生中和反应，导致溶液的pH值降低，以ben酚红为指示剂，测定溶液在555nm处吸收值的变hua，可以快速测得胰蛋白酶活性数据。胰蛋白酶在一定范围内与555nm处吸收值的降低呈良好的线性关系。

 

自备仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

试剂盒的组成

基础试剂：通常为试剂 1（R1）、试剂 2（R2），部分试剂盒可能含试剂 3（R3）等，主要成分包括缓冲液、酶、底物、辅助因子等，需标注各组分的装量（mL / 瓶）或可测试数量。

配套校准 / 质控组分（如适用）：校准品：含被测物标准品，搭配特定基质（如人血清、BSA 等），提供明确靶值，且定值需溯源至国际 / 国家标准品；

质控品：含不同浓度（高 / 中 / 低）被测物，用于验证检测结果准确性，靶值范围为批特异；

配套耗材（如适用）：如塑料滴管、封板膜等，标注具体数量。

注：不同批号试剂盒的各组分不得混用；校准品、质控品的赋值仅适用于本批号试剂盒。

 

测定步骤

步骤序号	操作步骤	操作要点	注意事项
1	实验准备	1. 试剂盒组分（R1、R2、标准品、质控品）室温平衡 15-20 分钟； 2. 处理待测样本（血清 / 血浆 / 匀浆等），按需稀释； 3. 校准微量加样枪，设置酶标仪检测波长	1. 试剂避免反复冻融； 2. 样本无溶血、脂血； 3. 吸头一次性使用
2	微量加样	反应板各孔加样（单孔用量）： - 空白孔：稀释液 20μL + R1 100μL； - 标准 / 质控孔：标品 / 质控品 20μL + R1 100μL； - 样本孔：样本 20μL + R1 100μL；轻1. 严格控制温育温度与时间； 2. 反应板加盖防液体蒸发轻混匀，室温孵育 5 分钟	1. 加样顺序不可颠倒； 2. 吸头勿接触孔壁，防止挂壁； 3. 避免试剂交叉污染
3	温育反应	各孔加 R2 20μL，混匀后 37℃温育 10-15 分钟（按说明书调整）	1. 严格控制温育温度与时间； 2. 反应板加盖防液体蒸发
4	终止反应	加终止液 20μL，轻柔混匀	1. 终止液为强酸 / 强碱，需戴手套操作； 2. 快速加样，保证各孔反应同步终止
5	吸光度测定	酶标仪以空白孔调零，测定各孔 OD 值	1. 测定前确认孔底无气泡、污渍； 2. 终止反应后 10 分钟内完成检测
6	结果计算	1. 计算 ΔOD=OD 样本 / 标品 - OD 空白； 2. 以标品浓度为横坐标、ΔOD 为纵坐标绘制标准曲线； 3. 样本浓度 = 曲线查得浓度 × 稀释倍数	1. 标准曲线 R²≥0.99； 2. 质控结果需在合格范围内
7	实验收尾	1. 按生物安全规范处理反应废液2. 剩余试剂密封后冷藏保存； 3. 清洗反应板 / 器材	1. 试剂开封后尽快用完； 2. 废弃物分类处置，避免污染

 

生hua试剂盒的核心分类

按检测原理和目标物类型，可分为以下几大类，覆盖多数实验场景：

1. 代谢物检测试剂盒用于检测血糖、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、尿酸、乳酸、bing酮酸等小分子代谢物，原理多为终点比色法 / 速率比色法。例如血糖试剂盒通过葡萄糖氧hua酶（GOD）- 过氧hua物酶（POD）偶联反应，生成有色物质，吸光度与葡萄糖浓度正相关。

2. 酶活性检测试剂盒适用于 SOD、CAT、POD、LDH、ALT、AST 等酶活性测定，以速率法为主。通过监测酶促反应过程中底物或产物的吸光度变hua速率，计算酶活性单位（U）。比如 SOD 试剂盒利用氮蓝四唑（NBT）光还原法，SOD 抑制 NBT 还原的程度与酶活性相关。

3. 蛋白定量试剂盒包括 BCA、Bradford、Lowry 法试剂盒，其中微量 BCA 试剂盒适合样本量少的场景。BCA 法基于碱性条件下蛋白与 Cu²⁺结合，还原 BCA 试剂生成紫色复合物，在 562nm 处有特征吸收峰。

4. 离子检测试剂盒用于检测钙、磷、钾、钠等无机离子，如钙试剂盒通过钙与偶氮砷 Ⅲ 结合生成有色络合物，进行比色定量。

 

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