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- DM-Cat6950
- 2025年11月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 灵敏度：
咨询
- 库存：
999
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 检测范围：
电询
- 检测方法：
双抗夹心法
- 应用：
科研实验
- 适应物种：
兔
- 标记物：
电询
- 样本：
血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液等
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥1380.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥1860.0 |
牛（Bovine）Q热（Q Fever）ELISA检测试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
产品货号：DM-Cat6950
产品规格：48/96T
检测原理
试剂盒采用双抗原一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被Q热抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中Q热（Q Fever）的存在与否。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取50μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；
3. 待测样本孔加待测样本50μL；
4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；
阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1. 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5. 有效期：6个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
酶标仪吸光度的标准值会受到哪些因素的影响？
酶标仪吸光度的标准值（实际为参考范围 / 临界值）并非固定，核心受仪器、实验体系、操作条件三类因素影响。
一、仪器相关因素
波长准确性：波长偏移会直接改变吸光度读数，比如目标波长 450nm 偏移为 440nm，可能导致标准值偏低。
仪器稳定性：长期未校准、光源衰减或检测器老化，会使吸光度读数漂移，标准值失去参考意义。
孔间一致性：酶标仪各孔光路差异（如板架不平、光路遮挡），会导致同一样本在不同孔的吸光度不同，影响标准值计算。
二、实验体系本身因素
试剂特性：酶底物的纯度、稳定性，反应缓冲液的 pH 值、离子强度，会改变酶促反应效率，进而影响最终吸光度。
标准品 / 对照品质量：标准品浓度不准确、阴性 / 阳性对照品污染或失效，会直接导致标准值设定偏差。
样品基质干扰：检测样品（如血清、尿液）中的杂质（如血红蛋白、脂质）会产生非特异性吸光，抬高背景吸光度。
三、操作与反应条件因素
反应时间与温度：酶促反应未达终点、温度偏离设定值（如 37℃变为 35℃），会导致吸光度未稳定，标准值波动。
加样误差：加样量不一致、气泡残留，会使反应体系浓度不均，吸光度读数离散度增大。
孵育环境：湿度不足导致反应液蒸发，或孵育箱温度不均，会改变局部反应效率，影响标准值校准。
四、其他辅助因素
微孔板类型：不同材质（如聚苯乙烯、聚丙烯）、是否透明 / 显色，会影响光的透过率，间接改变吸光度。
读数模式：单波长读数未扣除背景，或双波长选择不当，会引入干扰，导致标准值偏移。
上海笃玛生物科技有限公司
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文献和实验发病急剧伴有发烧、头疼、虚弱、食欲减退等症状和并发间质性肺炎的疾病，其病原体是立克次氏体Rickettsia（或 Coxiella） burneti。 1935年首先在澳大利亚的昆士兰（ Queensland）作为人类的疾病而被发现，此后在北美、地中海沿岸地区和非洲等地也有发现。原来它是某些种野兽间由螨类（ Haema- Physalis humerosa和 Ixodes holocyclus）为媒介所传染的疾病，后来感染于牛，进而感染于人。据说在美国有另一种螨类
时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding
化作用——氧分子、过氧化氢、氧自由基 5. 表面活性剂和去污剂 6.变性剂——脲和盐酸胍、高浓度盐、螯合、有机溶剂 7. 重金属离子和巯基试剂 8. 热 9. 机械力 10. 冷冻和脱水 11. 辐射 5. 酶活计算 ① 酶活定义 酶的活力单位：酶的1个活力单位是在该酶的最适条件下，在25℃、1 min内催 1μmol的底物转化为产物的酶量。 ② 定时法的计算 将酶与底物在特定条件下孵育，酶促反应开始进行，经过一定时间后，用终止液终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间即可
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