胰激肽原酶的测定，推荐色谱柱 TSKgel Phenyl-5

各种色谱的主要影响因素

辨越好，不同的凝胶具有不同的推荐上样体积，如下表：凝胶类型 推荐上样体积（%Vt）Sephadex 2-5%Sepharose 2-5%Sephacryl HR 1-2%Superdex PG 1-2%Superose PG 1-2%Superdex 0.5%Superose 0.5%对于利用Sephadex G25进行蛋白质脱盐的特殊情形，样品量达到柱体积的25%仍可以保证蛋白与盐分开。d、洗脱流速：一般较低的流速下（5~10cm/h）分辨率较高，但Superdex PG，Sepharose FF

原创:下游纯化简易讲义

体易于与细胞其他组分分离，但需要注意的是蛋白复性的步骤。一般采用盐酸胍溶解包含体蛋白后，用稀释的办法进行复性，也可以利用凝胶过滤色谱进行复性（已有多种凝胶可以促进蛋白质的复性的报道）。以下以rhGM-CSF（重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）的下游纯化工艺为例： E.coli细胞，超声破碎，离心收集包含体，用7mol/L盐酸胍溶解包含体蛋白，作1：70稀释使蛋白复性，加硫酸铵至一定浓度后，上样于Phenyl-Sepharose 6 FF（high sub）色谱柱，活性组分再上Q

蛋白纯化经验指南

原创：Chromatography weixingui@263.net，推荐书籍：《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》1）我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会