0.2ml平盖PCR八联排管（可用于荧光定量）

荧光定量 PCR 反应没有平台期—看完这篇文章，不必再纠结

的标准曲线用于定量分析呢？ 图 1. 标准品扩增曲线 我们回顾一下定量 PCR 的数学原理： 荧光定量 PCR 是在扩增曲线的指数期内划定阈值线，取阈值线与扩增曲线的交点所得到的 Ct 值（图 2）进行定量分析。这样做的原因也早已通过实验证明：以同一个样本进行 96 次相同的重复实验（图 3）可以看到 PCR 反应的终产物即平台期的荧光信号差异较大，重复性差，从而导致定量不准确，因此不适合用于定量分析。而指数期内荧光信号重复性好，所以用这个阶段的数据可以对靶标基因进行准确定量。另外，在指数

实时荧光定量 PCR 的原理及应用

定量的方法。 实时荧光定量 PCR 是目前确定样品中 DNA(或 cDNA) 拷贝数最敏感、最准确的方法。如果用于 RNA 检测，这被称为逆转录实时 PCR 即（Real-time RT-PCR）是实时 PCR 法，它是指对 DNA 或经过反转录（RT-PCR）的 RNA 通过聚合酶链式反应并实时监测 DNA 的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异 DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。 RealTime PCR 的基本目标是精确

荧光定量 PCR——想要实验结果可靠，各种对照不可少

怎么整板都没有扩增曲线，是哪一步实验出问题了吗？ 这个病原体这段时间怎么经常检出？不会是有污染了吧？ 在您看到荧光定量 PCR 结果的时候是否也有过这样的疑问？隐隐约约感觉实验某个步骤出现问题，却又不知该从何下手。别担心，有「对照精灵」们来助您一臂之力。 荧光定量 PCR 实验，从样本采集到结果分析包含多个实验步骤，针对不同的步骤，可以选择不同的对照对流程进行监控（图 1）。 图 1. 实验流程和常见阴阳性对照种类。 阴性对照 荧光定量 PCR 的灵敏度可以达到 1 拷贝/孔，如此高灵敏