DNA & siRNA 转染试剂 ScreenFect™ A

ScreenFect A+

DNA & siRNA 转染试剂

 

 

通过点击化学开发的新型脂质体！！

ScreenFect ™A plus（也称作ScreenFect ™A+）是通过点击化学（Click Chemistry）筛选^※1出的新型阳离子脂质体组成的转染试剂，适用于各种真核生物来源的细胞，也可直接添加至含有抗生素或者血清的培养基中。

使用 ScreenFect ™A plus转染试剂可将DNA和siRNA导入通用实验细胞系（HeLa、HepG2、MDCK等）、干细胞（小鼠ES细胞等）、血细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264.7等）、小胶质细胞、原代细胞（原代培养）和昆虫细胞中。其细胞毒性低，因此转染后无需更换培养基。另外，试剂成分中不含有任何有毒有害物质。

※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012

 

特点

● DNA和ScreenFect ™A plus试剂混合比例可选范围更广

● 使用一步法缩短分析时间至1天

● 可高效转染难以导入的细胞

● 成本低

 

ScreenFect ™A plus 转染性能

 

※ MCF-7：人乳腺癌来源细胞（上皮细胞样形态）（贴壁系）

※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

 

改善难以导入的细胞的转染效率！

 

 

※ MDCK：狗肾小管上皮细胞来源（贴壁系）

※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

 

改善难以导入的细胞的转染效率！

 

 

※ K562：人慢性髓性细胞白血病细胞来源（悬浮系）

※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

 

改善难以导入的细胞的转染效率！

 

◆应用数据

1. 向LNCaP细胞（贴壁系）中导入YFP融合基因的实验

进行向LNCaP细胞（贴壁系）中导入YFP融合基因的实验，在荧光显微镜下比较导入基因的表达效率。

使用ScreenFect ™A plus和增强剂SFA P-reagent，可以观察到与其他公司产品相同或更高的表达效率。

※ 数据刊登于BioWindow No.144 (2016年6月号)

LNCap (人前列腺癌) 中的性能比较

〔接种细胞数〕3×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板	〔接种细胞数〕1.5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板

 

2. 向HeLa细胞（贴壁系）中导入EGFP_mRNA的实验

进行向HeLa细胞（贴壁系）中导入EGFP_mRNA的实验，在荧光显微镜下比较EGFP的表达效率。

使用ScreenFect ™A plus和增强剂SFA P试剂（产品编号：191-18331、197-18333），可以观察到与其他公司产品相同或更高的表达效率。

※ 数据刊登于BioWindow No.144 (2016年6月号)

 

HeLa细胞中的mRNA转染性能比较

〔接种细胞数〕0.7 x 10⁵ cells/well

〔mRNA量〕0.1 µg/assay

〔转染试剂混合比例〕mRNA量 (µg) : ScreenFect ™ A plus 试剂(µL) = 1 : 4

〔检测时间〕转染后48 h

〔曝光时间〕2 s

 

3. 向hiPSC（201B7株）中导入GFP融合基因的实验

进行将hiPSC（201B7株) 通过反向转染（1-STEP)导入GFP融合基因的实验，在荧光显微镜以及流式细胞仪下比较导入基因的表达效率。

使用反向转染法转染hiPS细胞的效果优异，在StemSure^® hPSC培养基Δ和mTeSR™ 1两个培养基中，ScreenFect ™A plus表现出与其他公司产品相同或更高的导入效率。

※ 数据刊登于BioWindow No.144 (2016年6月号)

hiPSC（201B7株)中的性能比较

1-step   使用StemSure® hPSC培养基Δ
ScreenFect™A plus的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕4 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 0.5 〔孔板〕12孔板 〔备注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 进行稀释。	其他公司产品的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕2 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板

 

1-step   使用mTeSR™1培养基
ScreenFect™A plus和其他公司产品的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 〔备注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 进行稀释。

 

4. 向HeLa细胞（贴壁系）中导入PIK3CB siRNA的实验

使用反向转染（1-STEP）法以及正向转染（2-STEP）法进行向HeLa细胞中导入PIK3CB siRNA的实验，通过实时定量PCR测量PIK3CB mRNA的表达水平。

在定量结果的基础上与其他公司产品比较敲降效率，结果显示ScreenFect ™A plus表现出与其他公司产品相同或更高的敲降效率。

※ 数据刊登于BioWindow No.149 (2017年3月号)

HeLa细胞中的性能比较

〔接种细胞数〕1×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔转染试剂混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL   其他公司产品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔检测时间〕48 h后进行确认	〔接种细胞数〕0.5×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔转染试剂混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL   其他公司产品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔检测时间〕48 h后进行确认

 

◆使用方法、拥有使用实绩的细胞

1-Step与2-Step 操作比较

产品	ScreenFect™A plus	A公司新产品(+reagent)	A公司的新产品
各条件	1-Step	2-Step
实验方案天数	2 Days	3 Days
DNA量	少	多
是否需要调整细胞数	可随时调整	取决于预培养条件
是否需要胰蛋白酶处理	转染时	预培养时
基于HTS细胞检测的可操作性	+++++	+
是否需要更换培养基	取决于细胞

 

ScreenFect ™A plus一步法概要

1步法 → 从转染到本分析的时间可缩短24 h！

 

ScreenFect ™A plus 转染条件

DNA转染

DNA 转染 (/well)
孔板类型	表面积	培养基体积	SF-DNA 复合物 的总体积	DNA/稀释buffer	转染试剂/稀释buffer
96 wells	0.3 cm2	100 µL	10 µL	50 ng/5 μL	0.15 or 0.2 μL/5 μL
24 wells	2 cm2	500 µL	50 µL	250 ng/25 μL	0.75 or 1.0 μL/25 μL
12 wells	4 cm2	1,000 µL	100 µL	500 ng/50 μL	1.5 or 2.0 μL/50 μL
6 wells	10 cm2	2,000 µL	250 µL	1,250 ng/125 μL	3.75 or 5.0 μL/125 μL

注：进行大规模转染时，请在转染前准备多个微管，之后再进行转染。

例：10 cm培养皿转染相当于 → 5~6个样品（6孔板）

 

▼ ScreenFect ™A plus 推荐实验方案

产品随附的说明书中提供了简易的实验方案，请确认“相关资料”中的文件。

ScreenFect™A plus推荐使用1步转染法。在试剂方面，为保证充分的转染效率，推荐质粒DNA与转染试剂的混合比例为1 : 3~1 : 4。另外，如希望进一步抑制转染时的细胞毒性，请使用60~80%汇合度的细胞。

 

siRNA转染

siRNA 转染 (/well)
孔板类型	表面积	培养基体积	SF-siRNA 复合物 的总体积	siRNA/稀释buffer	转染试剂/稀释buffer
96 wells	0.3 cm2	100 µL	10 µL	1 pmol/5 µL	0.1～0.3 µL/5 µL
24 wells	2 cm2	500 µL	50 µL	5 pmol/25 µL	0.5～1.5 µL/25 µL
12 wells	4 cm2	1,000 µL	100 µL	10 pmol/50 µL	1.0～3 µL/50 µL
6 wells	10 cm2	2,000 µL	250 µL	25 pmol/125 µL	2.5～7.5 µL/125 µL

注：虽然ScreenFect ™A plus也可以用于siRNA转染，但更推荐使用ScreenFect ™ siRNA 进行siRNA转染。

 

拥有ScreenFect ™A & A plus 应用实例的细胞

更多详细资料请联系富士胶片和光。

No.	细胞名称	No.	细胞名称	No.	细胞名称	No.	细胞名称
1	143BTK	22	GP2-293	43	LLC-MK2	64	OLHNI-2
2	786-O	23	H9C2	44	LO2	65	Mouse overy cell
3	A2058	24	HCT116	45	LoVo	66	PC12
4	A375	25	HEK293	46	MC3T3	67	Plat-E
5	A549	26	HEK293 TN	47	MC3T3-E1	68	PLC8024
6	B16	27	HEK293A	48	MCF-10	69	Primary Fibroblast
7	B16F10	28	HEK293F	49	MCF-10A	70	RAW264.7
8	Ba/F3-CH1	29	HEK293FT	50	MCF-7	71	SH-SY5Y
9	BEAS-2B	30	HEK293T	51	MDCK	72	SK-Hep1
10	BEL-7402	31	HeLa	52	MEF	73	SKOV3
11	BT549	32	HeLa S3	53	mES	74	T98G
12	C2C12	33	HEp-2	54	mHSC	75	TE-13
13	Cell line from killifish 来自鳉鱼的细胞系	34	HepG2	55	Microglia 小胶质细胞	76	THP-1
14	CHO-K1	35	hiPSC	56	MLEC	77	U-251 MG
15	COS-7	36	HK2	57	MS-1	78	U2OS
16	DB lymphoma DB淋巴瘤	37	HKC	58	Myeloid dendritic cell (MDC) 骨髓树突状细胞	79	U937
17	DC 2.4	38	HL7704	59	NB1RGB	80	Vero
18	Du145	39	HuH-7	60	NCI-H1703	81	Drosophira ovary somatic cell
19	EL4	40	HUVEC	61	NE3	82	HT1080
20	Endothelium cell 内皮细胞	41	Ins-1	62	NIH 3T3	83	RH7777
21	EPC(carp)	42	L428	63	NK92	84	HaCaT

富士胶片和光将实时更新ScreenFect™数据库中的使用实例，如对上述内容有疑问，欢迎随时联系进行咨询。

 

◆产品列表

产品编号	产品名称	产品规格
293-73201	ScreenFect™ A	0.2 mL
299-73203		1 mL
297-73204		1 mL×5
293-75901	ScreenFect™ mRNA	0.2 mL
299-75903		1 mL
299-75001	ScreenFect™ siRNA	0.2 mL
295-75003		1 mL
290-80203	ScreenFect™ UP-293	1 L用
294-80201		100 mL用
191-18331	SFA P-reagent	100 μL
197-18333		500 μL
194-18181	ScreenFect™ Dilution Buffer	50 mL

 

【相关资料】

◆一步法和两步法实验流程的比较

产品名称	ScreenFect ™ A plus	Ａ厂家新产品 （+试剂）	Ａ厂家产品
推荐的实验流程	一步法	两步法
实验用时	２天	３天
所需DNA量	低	高
细胞数目调整	灵活 （细胞准备仅在转染之前）	不灵活 （取决于细胞预培养条件）
胰酶消化	需要 （仅在转染之前）	需要 （在细胞预培养之前）
适于高通量筛选	+++++	+
培养基的更换	取决于细胞系

 

一步法比两步法节省24小时！

 

高性价比的高性能基因导入试剂

ScreenFect ™ 通信

基因导入人 iPS 细胞实验数据

　　介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及推荐的试剂比例，以供参考。

 

◆导入人iPS细胞（201B7株）的转染操作实例

　　在这里，我们将介绍一些使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ（产品编号：197-17571）的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤，请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。

 

<转染试剂的配制>

将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。

 

< Matrigel 包被孔板>

1.  ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固，请避免在室温下溶解。

2.  用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。

3.  稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。

4.  在室温下孵育１小时以上。

 

<细胞悬液的配制>

1.  将 StemSure^® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻，并在一周内使用。

2.  将 bFGF（产品编号：064-05381,068-05384）按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure^® hPSC 培养基△中，配制成完全培养基（以下称为 sshPSC 培养基）。

3.  使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。

4.  将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中（以下称为 ROCKi+培养基）。

5.  去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基，用 PBS（-）清洗细胞一次。

*请在细胞汇片达到80％且处于对数增殖期时进行细胞转染。

6.  除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。

7.  在 37°C，5％CO₂ 培养箱中静置５分钟。

8.  用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基，将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。

9.  转移至 15 mL离心管中。

10. 室温下 1000 rpm（约170×g）离心３分钟。

11. 去除上清，用ROCKi+培养基重悬细胞。

12. 计算活细胞的数量。

13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×10⁵ cells/mL。

 

<转染>

添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中，使用移液器充分混匀，并接种在 12 孔板中。

※要点

接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。

 

◆实验数据

　　通过反向转染（1-STEP）将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞（201B7株），并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。

® hPSC 培养基Δ的使用>

细胞数：5×10⁵ cells/well

质粒 DNA 量：4 μg/assay

转染试剂混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5

容器：12 孔板

备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

 

细胞数：5 x 10⁵ cells/well

质粒 DNA 量：1 μg/assay

转染试剂混合比例：DNA数量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2

容器：12 孔板

备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

 

◆使用上的注意

●　建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。

●　建议基因导入时的细胞数约为 5×10⁵ cells/well。

●　当质粒 DNA 量多时，导入基因的表达量高会引起细胞死亡。

请点击【相关资料】查看PDF

 

◆Q＆A

Q1. 基因导入效率低怎么办？

A1. 通过优化DNA量和试剂用量可提高效率。另有优化Protocol（日语版/英语版），可联系富士胶片和光获取。此外，使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产品编号：191-18331）也可提高基因导入效率。

 

Q2. 如何提高表达效率？

A2. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产品编号：191-18331）可提高表达水平。

 

Q3. 转染试剂对细胞毒性强怎么办？

A3. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产品编号：191-18331）可降低细胞毒性。

 

Q4. 从哪些条件实验开始比较好？

A4. 可参考各ScreenFect™产品的快速Protocol（日语版/英语版），请联系富士胶片和光获取。

 

Q5. 转染过程是否需要更换培养基？

A5. 更换培养基不是必须的，但在添加转染试剂前更换新鲜的培养基可提高基因导入效率，改善细胞状态。

 

Q6. 培养基中能否含有血清和抗生素？

A6. 根据细胞类型、DNA导入量等因素，可能需要更换培养基，以适时控制培养基含或不含血清/抗生素。请根据实验用途进行讨论。

 

Q7. 1-Step、2-Step是什么？

A7. 1-Step是一种反向转染方法，即转染前通过在细胞分离状态下添加试剂来导入基因。

A7. 2-Step是一种正向转染法，即提前一天进行细胞的预培养，然后在细胞上添加转染试剂后导入基因。

 

Q8. 能否同时导入多个基因？

A8. 可以。请准备多种耐药性基因，推荐使用pEBMulti 和 pCAG。

 

Q9. ScreenFect ™A和ScreenFect ™A plus分别适用于哪种情况？

A9. 通常情况下推荐使用基因导入效率高的ScreenFect ™A plus。但如果其对细胞毒性强或与ScreenFect™A plus相比无性能差异时，推荐使用细胞毒性低且价格实惠的ScreenFect ™A。

 

Q10. 需要转染siRNA时，推荐使用哪种ScreenFect ™？

A10. 可使用ScreenFect ™ siRNA。视情况，ScreenFect ™A plus也能有效转染siRNA。使用ScreenFect ™siRNA无法达到预期结果时，可考虑两种试剂一同使用。

 

Q11. 需要转染mRNA时，推荐使用哪种ScreenFect ™？

A11. 可使用ScreenFect ™mRNA。与SFA P-reagent一同使用时，可有效转染mRNA，提高表达水平。

A11. 此外，ScreenFect ™A plus和SFA P-reagent共同使用的最适场景因细胞而异，部分情况下两者共同使用能达到最佳效果。单独使用ScreenFect ™mRNA无法达到预期结果时，可考虑上述两种试剂一同使用。

 

Q12. SFA P-reagent是什么？

A12. 将质粒DNA或mRNA导入各种细胞时，SFA P-reagent和ScreenFect ™一同使用可提高细胞导入率和转染分子的表达水平。此外，已确认添加SFA P-reagent还能显著降低转染试剂的细胞毒性。

 

Q13. 有在哪些细胞中的应用实例？

A13. 已在通用细胞系（HeLa、HepG2、MDCK、MCF-7、K562 等）、干细胞、造血细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264.7 等）、小胶质细胞、原代细胞、昆虫培养细胞、鱼类培养细胞及其他细胞中实现基因导入。

A11. 更多详情可查看优化Protocol（日语版/英语版），欢迎联系富士胶片和光获取。

 

Q14. 是否可提供试用装？

A14. 欢迎向我们联系并填写表格申请试用装。

 

Q15. ScreenFect ™是什么试剂？

A15. ScreenFect ™是一种由新型阳离子脂质体构成的转染试剂。

 

Q16. 冷冻存储会对产品性能有影响吗？

A16. 请勿使用冷冻后的产品。

 

Q17. 如何调整所用的质粒DNA？

A17. 推荐使用阴离子交换柱或氯化铯密度梯度离心法纯化的质粒DNA。

 

Q18. 血清会影响基因导入吗？

A18. 血清不会影响本产品的性能，但建议转染时避免使用EDTA 和硫酸葡聚糖等阴离子抑制剂。此外，转染时避免使用抗生素也可提高转染效率。