兔抗人BCL2/腺病毒E1B19kD涂覆结合蛋白就像多克隆抗

上海笃玛生物科技有限公司多克隆抗体的概念：由多个B淋巴细胞克隆所产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗体。多克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤：免疫动物、佐剂、免疫原、免疫、取血等。
多克隆抗体的制备步骤
兔抗人BCL2/腺病毒E1B19kD涂覆结合蛋白就像多克隆抗体
Rabbit anti-human BCL2/adenovirus E1B 19kD结合蛋白 like polyclonal Antibody
货号：DM-PA008000207
规格：50μl/150μl
注：仅供科研使用！
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一、器材

剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼科手术剪(剪血管用)一把，手术刀架，手术刀片，注射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。
兔抗人BCL2/腺病毒E1B19kD涂覆结合蛋白就像多克隆抗体
Rabbit anti-human BCL2/adenovirus E1B 19kD结合蛋白 like polyclonal Antibody
二、试剂

生理盐水(或PBS)

弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant， FCA)

弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant， FIA)

二甲苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3

三、免疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。

四、兔子的选择

兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。
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Rabbit anti-human BCL2/adenovirus E1B 19kD结合蛋白 like polyclonal Antibody
五、免疫

用生理盐水稀释免疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后大腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/4的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。

注：

抗原注射以前需要收集一些正常血清，已备检测抗体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。

免疫用的抗原必须纯化，否则影响抗体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注射。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免疫的效果，振荡后，1000rpm离心一分钟，如水相和油相不分层即可注射。首次免疫用FCA，以后都用FIA。

免疫方法可采用背部多点注射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下注射，每点注0.1ml，间隔2周后再于上述部位选不同点注射(不要选择临近位点，否则溃疡愈合不好)。每次免疫的抗原量约100μg。免疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。
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Rabbit anti-human BCL2/adenovirus E1B 19kD结合蛋白 like polyclonal Antibody
六、取血：

免疫一周后，可以耳动脉取血检测抗体效价。因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免疫后，可以获得较高效价的抗体，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫血。

前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血清。

最后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下：

1、家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。

2、沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血)。

3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离，剥离神经和结缔组织。

4、于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。

5、用小拇指垫在血管下，用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断)，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱。

6、松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
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七、血清的分离

如果用三角瓶或平皿盛血，将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr，转移到4oC沉淀过夜，第二天早上用吸管吸取血清。如果用离心管收集，37oC烘箱放置2hr，转移到4oC沉淀过夜，第二天早上离心，10000RCF，10分钟。在血清中加入NaN3 至终浓度0.02%，分装后-20oC保存。

小结：抗血清获得之前要件的抗体的效价、抗体的特异性以及抗体的亲和力；获得抗血清之后，要分装保存抗血清，一般情况下，-20度可保存数月至数年抗体的效价都不会发生变化。抗体的效价可以通过琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验进行鉴定。

八、还有以下优惠产品：
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DMD0824 大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0825 大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0826 大鼠组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒 96T/48T
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DMD0829 大鼠维生素K1(VK1)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0830 大鼠维生素B12(VB12)ELISA试剂盒 96T/48T
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DMD0832 大鼠维生素D2(VD2)ELISA试剂盒 96T/48T
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DMD0834 大鼠维生素A(VA)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0835 大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0836 大鼠双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0837 大鼠抗精子抗体(AsAb)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0838 大鼠甲状旁腺激素(PTH) ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0380 大鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0551 大鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0839 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0840 大鼠17-酮类固醇(17-KS)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0841 大鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0842 大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0843 大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0844 大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0845 大鼠中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒 96T/48T
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DMD0847 大鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA试剂盒 96T/48T
DMD0848 大鼠β细胞素(BTC)ELISA试剂盒 96T/48T
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DMD0445 大鼠脂联素(ADP)ELISA试剂盒 96T/48T
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DMD0865 大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒 96T/48T
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