磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒

概述
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，从样品中分离纯化高质量核酸，特殊包被的磁珠，在一定条件下对目的核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有毒试剂，安全、便捷、提取的核酸纯度高。使用本试剂盒纯化的核酸可以应用到各类下游分子生物学实验。

Production.no	名称	规格	储存条件	保质期
HRBD-0060	磁珠法血清游离DNA提取试剂盒	100T	4℃	180天

适用范围
从孕妇以及癌症患者等血清中提取游离DNA，或从血清中分离纯化高质量病毒DNA。用于产前检测，癌症患者的早期诊断等。适用于核酸自动化提取平台。
使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作，包括PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。
试剂盒包装及组成

试剂盒组成	数量
Buffer A	30 ml×1瓶
Buffer B	20mg×1瓶 初次使用加入加入1ml洗脱液溶解
磁珠	2 ml×1瓶
洗涤液Ⅰ	80 ml×1瓶
洗涤液Ⅱ	80 ml×1瓶
洗脱液	11ml×1瓶
使用说明书	1份

注意事项
1. Buffer B 4℃保存，可能会析出白色粉末状沉淀，使用前混合均匀，不影响使用效果。
2.磁珠用前一定要充分混匀。
3.如果血清量少于200µl，可以加生理盐水补至200µl。
操作步骤
1.裂解
a. 对于易裂解样本，取200µl血清到1.5mlEP管中，加入200µl Buffer A、10µl Buffer B，混合均匀（可用漩涡振荡器，1200～1800rpm）。然后把EP管置于恒温水箱中80℃温育10min，每隔3~5min，混匀一次。
b. 对于难裂解样本，取200µl血清到1.5mlEP管中，加入300µl Buffer A、10µl Buffer B，混合均匀（可用漩涡振荡器，1200～1800rpm）。然后把EP管置于恒温水箱中80℃温育10min，每隔3~5min，混匀一次。
2.结合
a. 对于易裂解样本，将EP管从温浴设备中取出，加入振荡混匀的磁珠20µl，加入异丙醇100 µl （自备）；
b. 对于难裂解样本，将EP管从温浴设备中取出，加入振荡混匀的磁珠20µl，加入异丙醇150 µl （自备）；
室温下颠倒混匀，结合5min。将EP管置于磁力架上进行磁分离，吸弃废液，（吸净管盖及管底残液）。
3.洗涤
⑴加入800µl洗涤液Ⅰ，点振5～10次，然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；
⑵加入800µl洗涤液Ⅱ，点振5～10次（若磁珠有结块现象，加大震荡力度和洗涤时间，尽量使磁珠分散），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；
⑶将EP管置于磁力架上，晾干若干分钟，至没有乙醇味道，一般为5~10min，根据室内温度和湿度可适当延长或缩短晾干时间。
4.洗脱
加入100µl洗脱液，缓慢抽吸混匀，65℃温浴10min。每隔2～3min轻摇EP管几下混匀。然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下游实验。

常见问题及参考意见

常见问题	可能的原因	建议
得率低	血清游离及病毒样本本身含有核酸量极少	可适当减少洗脱液体积，或增加样本取样量，Buffer A、Buffer B、磁珠及异丙醇用量可等比例增加，其他试剂用量不变。
	裂解不充分	对于部分血清浓稠或病毒难裂解样本，可适当延长裂解时间，但不要超过20min。
	提取后没有及时测定	提取后及时测定或进行下游实验，如果不能及时完成，可将提取核酸-20℃保存。
	样品保存不当	不能及时测定或进行下游实验的提取样本，要-20℃保存，并且避免反复冻融。
	磁珠用量过量	磁珠法核酸提取并不是磁珠用量越多越好，磁珠用量过量反而会使得率降低，建议遵循试剂盒说明书磁珠用法及用量，如有疑问，可与公司技术人员沟通。
	异丙醇用量不足	对于一些特殊样本，可以适当增加异丙醇用量以提高得率。
洗脱液有颜色	洗涤过程不充分	如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状，要增加点震力度及次数。
	裂解过程不充分	如样本中含有大量多糖及酚类物质且没有裂解充分，可能使洗脱液颜色加深，可适当延长裂解时间，但不要超过20min。
提取产物荧光定量PCR峰值过低	晾干步骤晾干不充分，洗脱液中含有乙醇量超标，会影响PCR扩增效率	适当延长晾干时间。判断乙醇是否完全晾干可以是否有乙醇味道为标准，或将EP管从磁力架上取下，磁珠不会很快下滑至管底即为乙醇已晾干。