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康朗生物
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非常品质
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文献和实验本身不带标签,则需要使用离子交换层析。 离子交换层析 离子交换层析推荐使用 RESOURCE 和 Capto HiRes 系列,能得到比较好的分辨率。不过要注意阴离子交换实验中不要添加阴离子型去垢剂,阳离子交换实验中则不能加入阳离子型去垢剂,以免影响层析柱载量。 离子交换之前需降低缓冲液中盐浓度,由于膜蛋白的特殊性,推荐使用脱盐柱进行此步骤,根据样品体积可选择 HiTrap Desalting 5 mL 或 HiPrep 26/10 Desalting 53 mL 两种常用柱型。最终上样体积不要超过
5 ml 或 HiPrep 26/10 Desalting 53 ml 两种常用柱型。最终上样体积不要超过柱体积 30%。 分子筛 膜蛋白的纯化流程中,分子筛是理想化的最终步骤。不仅可以去除聚集体以及与目的蛋白大小不同的杂质,还可以进行缓冲液更换。这些因素往往能够决定后续的结构测定是否顺利。 推荐使用高分辨率分子筛大体积预装柱 Superdex 200 Increase 10/300 GL 和 Superose 6 Increase 10/300 GL。其最大上样量可达
,G25,G50等去除小分子,效率高,处理量可达床体积30%。只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液,就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子,简单直接。由于只是去除小分子,柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟至半小时完成。Sephadex G25系列介质专为蛋白质脱盐而设计,预装柱HiTrap Desalting(5ml)可用针筒操作。HiPrep Desalting(26ml)可在数分钟为多至10ml样品脱盐。 16.疫苗纯化 使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF
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