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康朗生物
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文献和实验相关专题 S1核酸酶 S1核酸酶来源于稻谷曲霉(Aspergillusoryzae),是一种高度单链特异的核酸内切酶,在最适的酶催反应条件下,降解单链DNA或RNA,产生带5,-磷酸的单核苷酸或寡核苷酸。对双链DNA、双链RNA和DNA-RNA杂交体相对不敏感。通常水解单链DNA的速率要比水解双链DNA快75000倍。这种酶需要低水平的zn2+的激活,最适pH范围为4.0~4.3。一些螯合剂(如EDTA 和柠檬
探针需要S1核酸酶达到1000 单位/ ml可完成完全酶切,而绿豆核酸酶只需要10 单位/ ml就可达到相同的结果。绿豆核酸酶的生个缺点是在单位碱基上的用量比S1核酸酶多20倍。在下述实验方案中,绿豆核酸酶可以在第22步替代S1核酸酶。绿豆核酸酶消化作用的缓冲液:10 mmol/l醋酸钠(pH 4.6)-50 mmol/l NaCl-1 mmol/l ZnCl-1 mmol/l β-硫基乙醇-0.001%(V/V)Triton X-100。
S1核糖核酸酶保护分析实验(S1 Nuclease Protection Assay)
5. Incubate at 100 deg C for 3 minutes. 6. Transfer immediately to 58 deg C and incubate overnight. S1 digestion buffer (final concentration): 300 mM NaCl 30 mM sodium acetate, pH 5.5 2 mM zinc sulfate 1000 units/ml S1
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