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康朗生物
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文献和实验10 月 19 号,著名生化学家,08 年诺贝尔化学奖获得者,下村修(Osamu Shimomura)去世,享年 90 岁。作为目前全球生物学界使用率最高的标签蛋白,绿色荧光蛋白的发现可以说改变了生物学的进程,并将生物学从一片漆黑带入一篇光明。而它的发现者正是下村修,他在 1962-1982 年间,他和他的妻子在普林斯顿大学从 10000 个水母中提取到了荧光素——绿色荧光蛋白。生物学家们将绿色荧光蛋白基因和其他基因融合,表达出带有荧光标记的融合蛋白,通过荧光显微镜直接观察到融合蛋白的亚
等(1963)的透析标记法。1.Marsshall法(1)材料 抗体球蛋白溶液、0.5mol/L(pH9.0)碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、50ml小烧杯、4℃冰箱、电磁搅拌器、透析袋、玻棒、pH7.2或3.0的0.01mol/LPBS等。(2)方法及步骤①抗体的准备 取适量已知浓度的球蛋白溶液于烧杯中,再加人生理盐水及碳酸盐缓冲液,使最后免疫球蛋白浓度为20mg/ml,碳酸盐缓冲液容量为总量的1/10,混匀,将烧瓴置电磁搅拌器上(速度适当以不起泡沫为宜)5~10
免疫荧光组织(细胞)化学技术系列四:荧光素及其标记抗体的方法
制备荧光抗体是免疫荧光组织化学的重要技术之一,制备特异性强和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高效价的抗体。一、荧光素荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光,停止能量供给,发光也瞬时停止。可以产生明亮荧光的染料物质,称荧光素。目前主要常用于标记抗体的荧光素如下:1、异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)FITC是一种呈黄色粉末状,性质稳定,在室温下能保存2年以上,在低温中可保存多年,易溶于水和酒精。最大吸收光谱为490~495nm
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