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康朗生物
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文献和实验4配制方法:将17.907 g Na2HPO4溶于水,定容至100 ml。0.5 M NaH2PO4的配制方法:将7.800 g NaH2PO4溶于水,定容至100 ml。2. 染色步骤(1)染色:加入适量配制好的GUS 染液于24孔板的孔中,将待测样品浸到GUS染液中,将24孔板置于37℃保温箱中放置6 h。(2)漂洗:先后用50%,70%,100%的乙醇漂洗样品,每次浸泡5分钟。(3)脱色:加入100%乙醇浸泡直至完全脱色。(4)记录:在体视显微镜下拍照记录。二、GUS报导基因的定量检测GUS
ml,溴酚蓝0.5g,SDS l0g,溶于水,用HCI调PH至8.0,定容至500ml。( 11)脱色液 甲醇:乙酸:水=5:1 :5(体积比)( 12)染色液(0.25%考马斯亮蓝R250)1.00g考马斯亮蓝R250,用脱色液400ml溶解,过滤备用。( 13)低分子质量标准蛋白溶液,包括溶菌酶(MW=14400Da)大豆胰蛋白酶抑制剂(215000)、碳酸酐酶(310000)、卵白蛋白(450000)、牛血清白蛋白 (662000)、磷酸化酶B (925000)。用样品缓冲液配成2mg/ml
分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。 6. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。 7. 2~8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。 8. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2~
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