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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
1000
- 供应商:
康朗生物
- 检测范围:
见说明书
- 检测方法:
酶联免疫
- 应用:
科研
- 标记物:
见说明书
- 样本:
血清/组织/尿液
英文学名:C8b ELISA kit
科研名称:人补体因子8b(C8b)elisa定量试剂盒
实验名称:人补体因子8b(C8b)ELISA试剂盒
规格:48T/96
保存:2-8℃(低温避光)
产品的用途:仅供科研ELISA检测试剂盒。
检测种属:人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。
ELISA常用的方法:双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。
人补体因子8b(C8b)ELISA检测试剂盒(血清):血清是最常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简单。
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。(最好将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
(血浆):用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
(细胞培养上清):取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
人补体因子8b(C8b)ELISA检测试剂盒(细胞裂解液):
1) 吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2) 收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
3) 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
4) 将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
5) 4℃ 10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
(组织匀浆液):
1) 将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
2) 将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分
3) 将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例匀浆,例如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)
4) 吸取匀浆液到离心管,4℃ 5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
人补体因子8b(C8b)ELISA检测试剂盒(尿液、唾液等其他液体生物样本):1000×g离心20min,取上清即可检测。
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文献和实验C5b67+C8 C5b678 + C9 C5b6789n (膜攻击复合体) 细胞裂解 C5b:不稳定,C6和C7的受体 C5b67:与细胞膜紧密联系/稳定复合物/对细胞膜不造成损伤 C8b:C5b67结合 C8a-g:结合到C8b C8g :插入细胞的脂质膜 (1)使复合物稳定附着 (2)诱导C9分子聚合C5b6789n >4:发生溶胞>12:聚C9二. 旁路(替代)激活途径 与经典途径不同,旁路(替代)激活途径是不经过C1、C4、 C2途径
-down模式(即间接法)联合抗人检测抗体进行分析,因此不受影响。相比之下,SARS-CoV-2抗原的免疫分析通常使用夹心法模式,容易受到干扰性抗体的影响。 判定干扰性抗体是否是导致错误结果的原因,可以使用市面上商业化的ELISA试剂盒进行检测,这些试剂盒设计用于鉴别嗜异性抗体、HAMA和RF(通常简称为HAMA-ELISA)。鉴定后,常使用HAMA阻断剂来解决干扰问题。该解决方案的缺点是更多的生物活性成分-抗体-被添加到分析中,这可能会导致新的干扰。一般情况,多数生产商会提供几种不同的HAMA阻断
。另外研究表明,C9是通过C8而同c 5b-8结合的,因C9不能同C5b-7相结合,而其同C5b-8的结合则可被抗C8的抗体所抑制。 图5-10 C8分子的结构(模式图) C8的基因定位较复杂,其中编码α链和β链的基因C8A和C8B定位于人的第1号染色体,而编码γ链的基因C8G则定位于第9号染色体的长臂。目前已对C8β链的cDNA克隆成功,并做了序列分析,发现其与C9具有高度的同源性,而且二者均含有丰富的半胱氨酸的膜嵌入区。C8的α链和β链在遗传
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