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- 技术资料
- 保存条件:
-20度
- 保质期:
12个月
- 供应商:
凯基生物
- 规格:
200 tests
凯基快速型 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核 DNA 的断裂情况, 其原理是生物素(Biotin)标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA的 3′-OH 末端,并可与连接辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联·苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂,因而没有 3′-OH 形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片或爬片)的凋亡原位检测
TUNEL 检测同时需要设阳性和阴性对照,以显示试验的客观性及准确性。可使用本试剂盒制备阳性片(使用客户自备样本),其后续步骤与待测样本同样进行。
【技术参数】
实验类型:细胞凋亡检测
检测方法: 显微观察计数法
性质说明: -
保存条件:-20℃,保存 12个月
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文献和实验在胞质中以单体形式存在,发出绿色的荧光。可以在荧光显微镜下,或流式检测。采用488nm激发,其检测波长分别是527nm和590nm。整个实验过程操作简单,只需要30min就可以见到结果。Caspase家族可以检测的分子非常多,也有不少商业的试剂盒可以应用。即使没有相应的试剂盒,只要有相应抗体基本上是可以检测的,具体的方法是参照细胞内蛋白检测的步骤。在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变,细胞膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞
性,也不宜计算凋亡率。 琼脂糖凝胶电泳可以比较不同组别的凋亡程度,但不能得出凋亡率。 TUNEL法太敏感,有DNA断裂的细胞应该都能着色,所以很多人做出的结果不是绝大部分阳性就是全部不着色(可能试剂问题或实验操作问题)。 PI单染色法流式分析:多用于检测细胞周期分布。早期凋亡细胞也可以检测到,表现为亚二倍体峰。 我觉得检测凋亡率最好的方法还是Annexin-V-FITC/PI双染色、流式细胞仪分析法,可以得出明确的凋亡率,并区分坏死细胞,其原理是:在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变,细胞
)的吸光值,然后进行计算。计算方法有多种,大致可分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。 a. 阳性判定值 阳性判定值(cut-off value)一般为阴性对照 A 值加上一个特定的常数,以此作为判断结果阳性或阴性的标准。 用此法判断结果要求实验条件十分恒定,试剂的制备必须标准化,阳性和阴性的对照品应符合一定的规格,须配用精密的仪器,并严格按规定操作。阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。现举某种检测 HBsAg 的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含
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