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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
密封干燥保存
- 保质期:
6个月
- 库存:
1000
- 供应商:
钰博生物
1. 我们生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
2. RIPA即Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
3. RIPA裂解液(强)的主要成分为SDS、NP-40 、sodium deoxycholate 及aprotinin等多种蛋白酶抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。
4. 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
- RIPA裂解液(强)使用方法:
对于培养细胞样品:
1. 取适当量的 RIPA 裂解液混匀,在使用前数分钟内加入 PMSF(货号 WB0114),使 PMSF 的最终
浓度为 1mM。
2. 对于贴壁细胞,去除培养液用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍,加入适量裂解液,用枪吹打
数下,使裂解液和细胞充分接触,轻轻的摇晃约 5-10 分钟,充分裂解后,10000-14000g 离心 10 分钟,
取上清,即可进行后续操作。
裂解液用量说明: 用于不同规格标准培养板裂解液容量
板规格/表面积 试剂容量
100mm 500-1000μι
60mm 250-500μι
6-well plate 200-400μιper well
24-well plate 100-200μιper well
96-well plate 50-100μιper well
3. 对于悬浮细胞,离心收集细胞,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍,加入适量裂解液,用枪
吹打把细胞吹散,用手指轻弹或旋涡震荡 5-10 分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞
沉淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解,充分裂解后,10000-14000g 离心 10 分钟,取上清,
即可进行后续操作。
RIPA裂解液(强)对于组织样品:
1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切成
几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
2. 取适当量的 RIPA 裂解液混匀,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
3. 按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10 的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可
以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。
4. 用匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3- 5 分钟,取上清,即可进行后续作。
注:RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基
因组 DNA 等的复合物。
yb-3028R phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr668)磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-3029R phospho-ASK1 (Ser967)磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体 浓度1mg/ml
yb-3031R phospho-ASK1 (Thr845)磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体 浓度1mg/ml
yb-3033R phospho-ATF2 (Thr69/71)磷酸化活化复制因子2抗体 浓度1mg/ml
yb-3034R Phospho-ATP1A1 (Tyr10)磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体 浓度1mg/ml
yb-3035R Phospho-ATP1A1 (Ser16)磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体 浓度1mg/ml
yb-2745R Acetyl CoA Carboxylase乙酰辅酶A羧化酶抗体 浓度1mg/ml
yb-3036R Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78)磷酸化乙酰辅酶A羧化酶抗体 浓度1mg/ml
yb-3038R Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)磷酸化Ack1抗体 浓度1mg/ml
yb-3025R phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体 浓度1mg/ml
yb-3026R phospho-AMPK beta 1 (Ser108)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体 浓度1mg/ml
yb-3022R phospho-ALK (Tyr1604)磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体 浓度1mg/ml
yb-2272R phospho-ATM(Ser1981)磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-3037R phospho-ATP citrate lyase (Ser455)磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体 浓度1mg/ml
yb-3030R phospho-ATR (Ser428)磷酸化ATR抗体 浓度1mg/ml
yb-7960R AMN1细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体 浓度1mg/ml
yb-7957R ALG11天门冬酰胺连接糖基化11抗体 浓度1mg/ml
yb-3777R ASF1A细胞衰老相关蛋白ASF1A抗体 浓度1mg/ml
yb-8457R AGPHD1氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-4119R ASGPR1唾液酸糖蛋白受体1抗体 浓度1mg/ml
yb-9100R ARSF芳香基硫酸酯酶F抗体 浓度1mg/ml
yb-6980R AKAP5A激酶锚定蛋白5抗体 浓度1mg/ml
yb-4807R ATXN3L小脑脊髓共济失调蛋白3抗体 浓度1mg/ml
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文献和实验1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g (1%)0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml (1%)Aprotinin
细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程,通常表现为核浓缩,起皱,膜发泡以及 DNA 片段化。WB 是研究细胞凋亡机理的基本方法之一,但是 WB 也不是谁都能做成功的,因为有可能你的第一步就做错了!用 WB 做细胞凋亡研究样品制备是第一步,样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备,看你是不是这样做的:自配裂解液或者购买 RIPA,加上样品研磨啊研磨,孵育啊孵育,然后离心扔掉沉淀(RIPA 不可溶组分),取上清(RIPA 可溶组分)进行下游实验。对对对!都是这么做啊,扔
,严重影响实验。考虑成本的小朋友们,完全没有必要担心,一瓶 200g 的脱毛膏,可用于 400 只小鼠的脱毛(以心肌梗死模型为例),成本还是很低的,最关键的是,效果好!有同学拿宠物脱毛膏给小鼠脱毛,脱毛速度更快,但是对小鼠皮肤有明显的损伤,还是建议用人用脱毛膏,效果满意,且无副作用。有研究表明,脱毛膏相比传统脱毛剂(硫化钠、松香 / 石蜡及丙酸睾丸酮),脱毛速度更快,脱毛效果外观最佳,对皮肤损伤最轻 [3]。小鼠脱毛哪家强?唯有脱毛膏!强烈建议各位新手、老手,放弃眼科剪及电动剃毛器,采用脱毛膏备皮
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