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细胞组织蛋白酶L(CATHEPSIN L)活性比色法定量检测试剂盒 操作体会:
1. 控制好染色步骤;
2. 组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定溶液可延长或缩短染色时间; 3. 0.2%冰醋酸水溶溶液洗,可使色调清晰鲜艳;
3. 磷钼酸水溶溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。
细胞组织蛋白酶L(CATHEPSIN L)活性比色法定量检测试剂盒 产品优势:
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文献和实验组织蛋白酶 cathepsin 在各种动物组织的细胞内(特别是溶酶体部分)发现的一类蛋白酶。此名源自希腊语的“消化”,为威尔斯达特( R. Willstā atter, 1929)命名的。来源于同一种类组织细胞的也是由组织蛋白酶 A. B. C. D. E等多种酶组成。可以根据所作用的代表性底物的种类进行分类,但似乎各自还有数种同工酶。组织蛋白酶 A的代表性底物是 N-苄氧基羰基 -L-谷酰胺 -L-苯丙氨酸,最适 pH约 5.5( 3— 6),可能是一种羧肽酶,可为二异丙基磷氟酸
计算出底物消耗速度或产物生成速度,将速度换算为μmol/min即是以国际单位表示的酶活性。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L,取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育,t min后加入终止液Ve(mL),检测到的净吸光度增加为A,该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得),比色皿光径为 b cm。③ 连续监测法计算 酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间(2-60 s)连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。连续监测法
发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1.准备工作: A、 裂解液溶解后混匀,冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备:每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT,冰浴备用。 2.样本处理: A、悬浮细胞 1) 诱导完成后的细胞,2000 rpm离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS轻轻重悬细胞并计数
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