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- 2025年07月12日
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- 详细信息
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- 技术资料
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密封干燥保存
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6个月
- 英文名：
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Kit
- 库存：
1000
- 供应商：
钰博生物
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Kit Hieff™第一条链 cDNA合成试剂盒产品描述
HieffTM First Strand cDNA Synthesis Kit基于HieffTM Reverse Transcriptase，该酶热稳定性提高，在50℃的半衰期超过240min，且可长时间耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。且HieffTM Reverse Transcriptase的独特设计，进一步增强了模板亲和力和行进性，使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升，可获得长达20 kb的cDNA，并且对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。
本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量第一条链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random hexamers和oligo（dT）18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中，5 × RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP； HieffTMEnzyme Mix包含HieffTM Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要，选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。
产品组分
组分编号
组分名称
产品编号/规格
11102ES50（50T）
11102ES72（5×50T）
11102-A
RNase free ddH2O
1 ml
5×1 ml
11102-B
5×RT Mix
200 μl
5×200 μl
11102-C
HieffTM Enzyme Mix*
50 μl
5×50 μl
11102-D
Oligo dT18 (0.5 μg/μl)
50 μl
5×50 μl
11102-E
Random hexamers (N6)
50 μl
5×50 μl
* 包含RNase inhibitor，用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品在-20 ºC保存。有效期1年。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1：以500 ng mouse total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增nebulin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2：以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测3：以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4：以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板，以Oligo dT18和Random hexamers为引物，测试qRT-PCR性能。
以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。
客户需要准备的材料
1.RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
2.水浴锅或PCR仪
3.冰
4.RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。
引物选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo dT18，其与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
3）Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Kit Hieff™第一条链 cDNA合成试剂盒应用实例
1 第一条链cDNA合成*（以20μl反应体系为例）
1）按照下表在RNase free离心管中配制如下混合液：
RNase free ddH2O
to 20 μl
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)
or Random Primer
or Gene Speicific Primers
1 μl
or 1 μl
or 2 pmol
5× RT Reaction Mix
4 μl
HieffTM Enzyme Mix**
0.8-1μl
模板RNA
Total RNA: 50 ng-5 μg/mRNA: 5-500 ng
*可选步骤（一般不需要）：如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却 5min，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
** HieffTM Enzyme Mix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请瞬时离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可每次按照0.8μl使用，不会影响使用效果。
2）用移液枪轻轻吹打混匀。
3）如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
4）65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活HieffTM Reverse Transcriptase。
2 RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
1）建议反应条件
Components
Volume
Final Concentration
cDNA Template
2 μl
as required
Forward Primer (10 μM)
1 μl
0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)
1 μl
0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)
5 μl
1×
2.5 mM dNTPs
4 μl
0.2 mM
Taq DNA Polymerase
0.5 μl
2.5 units
ddH2O to final volume
50 μl
Not applicable
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Kit Hieff™第一条链 cDNA合成试剂盒
注意事项
1）所有操作均应在冰上进行。
2）除使用RNase free的枪头和离心管外，RNA实验用的试剂建议专用，并在单独的洁净的区域操作。操作时，戴上口罩和一次性手套，避免说话。总RNA提取完成后，建议取少量跑1%琼脂糖凝胶电泳，检验RNA的完整性。
3）逆转录反应抑制物包括酚，盐，SDS，EDTA等。建议用75%乙醇 (用DEPC水配制)仔细洗涤RNA沉淀 (轻弹管底让沉淀悬浮，并静置数分钟)。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Kit Hieff™第一条链 cDNA合成试剂盒yb1776 hGM-CSF-ELISA "人粒细胞巨噬细胞刺激因子酶联免疫试剂盒
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本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量第一条链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random hexamers和oligo（dT）18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中，5 × RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP； HieffTMEnzyme Mix包含HieffTM Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要，选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。
产品组分
组分编号
组分名称
产品编号/规格
11102ES50（50T）
11102ES72（5×50T）
11102-A
RNase free ddH2O
1 ml
5×1 ml
11102-B
5×RT Mix
200 μl
5×200 μl
11102-C
HieffTM Enzyme Mix*
50 μl
5×50 μl
11102-D
Oligo dT18 (0.5 μg/μl)
50 μl
5×50 μl
11102-E
Random hexamers (N6)
50 μl
5×50 μl
* 包含RNase inhibitor，用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品在-20 ºC保存。有效期1年。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1：以500 ng mouse total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增nebulin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2：以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测3：以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4：以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板，以Oligo dT18和Random hexamers为引物，测试qRT-PCR性能。
以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。
客户需要准备的材料
1.RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
2.水浴锅或PCR仪
3.冰
4.RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。
引物选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo dT18，其与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
3）Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Kit Hieff™第一条链 cDNA合成试剂盒应用实例
1 第一条链cDNA合成*（以20μl反应体系为例）
1）按照下表在RNase free离心管中配制如下混合液：
RNase free ddH2O
to 20 μl
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)
or Random Primer
or Gene Speicific Primers
1 μl
or 1 μl
or 2 pmol
5× RT Reaction Mix
4 μl
HieffTM Enzyme Mix**
0.8-1μl
模板RNA
Total RNA: 50 ng-5 μg/mRNA: 5-500 ng
*可选步骤（一般不需要）：如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却 5min，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
** HieffTM Enzyme Mix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请瞬时离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可每次按照0.8μl使用，不会影响使用效果。
2）用移液枪轻轻吹打混匀。
3）如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
4）65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活HieffTM Reverse Transcriptase。
2 RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
1）建议反应条件
Components
Volume
Final Concentration
cDNA Template
2 μl
as required
Forward Primer (10 μM)
1 μl
0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)
1 μl
0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)
5 μl
1×
2.5 mM dNTPs
4 μl
0.2 mM
Taq DNA Polymerase
0.5 μl
2.5 units
ddH2O to final volume
50 μl
Not applicable
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注意事项
1）所有操作均应在冰上进行。
2）除使用RNase free的枪头和离心管外，RNA实验用的试剂建议专用，并在单独的洁净的区域操作。操作时，戴上口罩和一次性手套，避免说话。总RNA提取完成后，建议取少量跑1%琼脂糖凝胶电泳，检验RNA的完整性。
3）逆转录反应抑制物包括酚，盐，SDS，EDTA等。建议用75%乙醇 (用DEPC水配制)仔细洗涤RNA沉淀 (轻弹管底让沉淀悬浮，并静置数分钟)。
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文献和实验相关实验
有SMART cDNA 合成和文库构建到? TriplEx2 或者Creator 供体载体 pDNR-LIB所需的试剂。因为该试剂盒是特别针对文库构建来设计的，所以它与Clontech™ PCR-Select™cDNA 差减杂交试剂盒不能配合使用。 SMART PCR cDNA Synthesis Kit 可以用来与Clontech™ PCR-Select™ cDNA 差减技术一起使用。总RNA 不能直接用来做差减实验，但可以通过SMART PCR cDNA Synthesis Kit 来扩增出
First-Strand cDNA Synthesis Kit
cDNA Synthesis from MOLT-4 Cells
second strand yield. 11. Add 0.5 ml PN buffer from Qiegen Nucleotide Removal Kit to the remaining reaction, and mix it ,load it into the spin column, and follow the pr℃edures comimg with the kit to purify the double strand DNA. 12. Elute the cDNA
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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