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- YB10909ES20
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
密封干燥保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit
- 库存：
1000
- 供应商：
钰博生物
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒产品描述
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。4）可连接长达10kb目的产物。
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒产品用途
平末端PCR产物的快速克隆。
克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。
产品组分
组分编号
组分名称
产品货号（规格）
10909ES20（20T）
10909ES60（5×20T）
10909-A
pESI-Blunt vector 30ng/µl)
20µl
5×20µl
10909-B
1kb control insert(40ng/µl)
5µl
5×5µl
10909-C
10×Enhancer
20µl
5×20µl
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒运输和保存方法
冰袋运输。-20°C保存，避免反复冻融。有效期一年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
♣ Control DNA 片段的克隆实验
1）在无菌微量离心管中配制下列DNA溶液，以10µl为例。
1kb control insert (40ng/µl)
1µl
10 ´ Enhancer
1µl
pESI-Blunt vector (30ng/µl)
1µl
ddH2O
7µl
2）混匀上述体系。于室温（20-30℃）反应5min。
【注】：连接反应不可于冰上进行。反应时间不要超过5min，一般1-2min即可完成连接反应，得到足够的重组子。
3）连接产物可直接转化或于-20℃保存。
4）全量10ml加入100ml感受态细胞，轻轻混匀，室温放置5min。
【注1】：也可取5ml连接液，加入50ml感受态细胞中（加入体积不超过感受态细胞体积的1/10)。
【注2】：通常使用商品化的感受态细胞不需要冰浴和热休克、室温放置5min便可获得足够多转化子，如果感受态细胞效率较低时，可以按照冰浴热激的标准程序进行。
5）加300-500ml LB或者SOC培养基(不含抗生素)，37℃180 rpm振荡培养10min。
6） 取200ml菌液涂板（含氨苄抗性的LB或SOC固体培养基），培养过夜（如果预计转化子少，为得到较多克隆，4000 rpm 离心1min，吸弃掉部分上清，保留100ml，轻弹悬浮菌体，取全部菌液涂板）。
♣ 一般DNA片段的克隆实验
所插入片段为平末端产物，利用高保真酶（如Pfu酶，Yeasen Cat#10134）扩增得到的产物如无非特异性条带、引物二聚体可直接进行连接反应。
否则建议胶回收后使用。
【注】：a、PCR产物不能磷酸化。
b、如扩增模板为质粒，模板质粒会在后续实验中引起假阳性，因此推荐PCR产物进行胶回收后连接。
1）按照下表配制连接体系（以10µl为例*）
10 ´ Enhancer
1µl
pESI-Blunt vector (30ng/µl)
1µl
插入片段**
0.5-8µl
ddH2O
To 10µl
【注】：* 可根据具体实验情况按照上述比例调整反应体系。
** 不同的插入片段所用量参考下表
插入片段大小（1kb）
最佳用量(ng)
0.1-1kb
20-50 ng
1-2kb
50-100 ng
2-5kb
100-200 ng
2）混匀上述体系。于室温（20-30℃）反应5min。
【注】：连接反应不可于冰上进行。反应时间不要超过5min，一般1-2min即可完成连接反应，得到足够的重组子。
3）全量10ml加入100ml感受态细胞，轻轻混匀，室温放置5min。
【注1】：也可取5ml连接液，加入50ml感受态细胞中（加入体积不超过感受态细胞体积的1/10)。
【注2】：通常使用商品化的感受态细胞不需要冰浴和热休克、室温放置5min便可获得足够多转化子，如果感受态细胞效率较低时，可以按照冰浴热激的标准程序进行。
4）加300-500ml LB或者SOC培养基(不含抗生素)，37℃ 180 rpm振荡培养10min。
【注】：通常商品化的感受态细胞不超过2kb插入片段情况下，10min复苏可以得到足够多转化子，如果感受态效率低或者插入片段长转化子少的情况下可以提高复苏时间到30-60min以得到更多的转化子。
5） 取200ml菌液涂板（含氨苄抗性的LB或SOC固体培养基），培养过夜（如果预计转化子少，为得到较多克隆，4000 rpm 离心1min，吸弃掉部分上清，保留100ml，轻弹悬浮菌体，取全部菌液涂板）。
6）转化子的筛选鉴定
① 菌液PCR鉴定；
② 质粒大小鉴定：挑取单克隆，抽提质粒后可根据质粒大小进行鉴定。
③ 酶切鉴定：根据克隆实验设计，选择合适的限制性内切酶进行鉴定。
④ 测序分析：可选测序引物序列如下
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：CAGGAAACAGCTATGACC
【注】：本制品阳性率相当高，一般情况下，阳性克隆率接近100%，只要是长出来的菌落正常（不是污染的杂菌，转化子数量也不算太少），基本就是阳性克隆，因此插入片段不超过2-3kb的情况下可以不用鉴定直接挑1-2个菌去测序。
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒yb1518 MGS 巨噬细胞生长因子 Macrophage Growth Supplement 50 ml
yb1519 KGS 角质细胞生长因子 Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1520 KGS-2 角质细胞生长因子（不含 BPE) BPE-free Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1521 KGS-acf 角质细胞生长因子（不含动物成分） Keratinocyte Growth Supplement-animal component free 5 ml
yb1522 MelGS 黑色素细胞生长因子 Melanocyte Growth Supplement 5 ml
yb1523 MelGS-2 黑色素细胞生长因子（不含TPA) TPA-free Melanocyte Growth Supplement 5 ml
yb1524 FGS 成纤维细胞生长因子 Fibroblast Growth Supplement 5 ml
yb1525 FGS-sf 成纤维细胞生长因子-sf Fibroblast Growth Supplement-sf 5 ml
yb1526 FGS-acf 成纤维细胞生长因子（不含动物成分） Fibroblast Growth Supplement-animal component free 5 ml
yb1527 FGS-2 成纤维细胞生长因子-2 Fibroblast Growth Supplement-2 5 ml
yb1528 TEpiCGS 扁桃体上皮细胞生长因子 Tonsil Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1529 OKGS 口腔角质细胞生长因子 Oral Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1530 CoEpiCGSS 结肠上皮细胞生长因子 Colonic Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1531 BEpiCGS 支气管上皮细胞生长因子 Bronchial Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1532 SAEpiCGS 小气道上皮细胞生长因子 Small Airway Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1533 SkMCGS 骨骼肌细胞生长因子 Skeletal Muscle Cell Growth Supplement 5 ml
yb1534 EpiCGS 上皮细胞生长因子 Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1535 EpiCGS-2 上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-2 5 ml
yb1536 EpiCGS-a 动物上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-animal 5 ml
yb1537 MCGS 肾系膜细胞生长因子 Mesangial Cell Growth Supplement 5 ml
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。4）可连接长达10kb目的产物。
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒产品用途
平末端PCR产物的快速克隆。
克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。
产品组分
组分编号
组分名称
产品货号（规格）
10909ES20（20T）
10909ES60（5×20T）
10909-A
pESI-Blunt vector 30ng/µl)
20µl
5×20µl
10909-B
1kb control insert(40ng/µl)
5µl
5×5µl
10909-C
10×Enhancer
20µl
5×20µl
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒运输和保存方法
冰袋运输。-20°C保存，避免反复冻融。有效期一年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
♣ Control DNA 片段的克隆实验
1）在无菌微量离心管中配制下列DNA溶液，以10µl为例。
1kb control insert (40ng/µl)
1µl
10 ´ Enhancer
1µl
pESI-Blunt vector (30ng/µl)
1µl
ddH2O
7µl
2）混匀上述体系。于室温（20-30℃）反应5min。
【注】：连接反应不可于冰上进行。反应时间不要超过5min，一般1-2min即可完成连接反应，得到足够的重组子。
3）连接产物可直接转化或于-20℃保存。
4）全量10ml加入100ml感受态细胞，轻轻混匀，室温放置5min。
【注1】：也可取5ml连接液，加入50ml感受态细胞中（加入体积不超过感受态细胞体积的1/10)。
【注2】：通常使用商品化的感受态细胞不需要冰浴和热休克、室温放置5min便可获得足够多转化子，如果感受态细胞效率较低时，可以按照冰浴热激的标准程序进行。
5）加300-500ml LB或者SOC培养基(不含抗生素)，37℃180 rpm振荡培养10min。
6） 取200ml菌液涂板（含氨苄抗性的LB或SOC固体培养基），培养过夜（如果预计转化子少，为得到较多克隆，4000 rpm 离心1min，吸弃掉部分上清，保留100ml，轻弹悬浮菌体，取全部菌液涂板）。
♣ 一般DNA片段的克隆实验
所插入片段为平末端产物，利用高保真酶（如Pfu酶，Yeasen Cat#10134）扩增得到的产物如无非特异性条带、引物二聚体可直接进行连接反应。
否则建议胶回收后使用。
【注】：a、PCR产物不能磷酸化。
b、如扩增模板为质粒，模板质粒会在后续实验中引起假阳性，因此推荐PCR产物进行胶回收后连接。
1）按照下表配制连接体系（以10µl为例*）
10 ´ Enhancer
1µl
pESI-Blunt vector (30ng/µl)
1µl
插入片段**
0.5-8µl
ddH2O
To 10µl
【注】：* 可根据具体实验情况按照上述比例调整反应体系。
** 不同的插入片段所用量参考下表
插入片段大小（1kb）
最佳用量(ng)
0.1-1kb
20-50 ng
1-2kb
50-100 ng
2-5kb
100-200 ng
2）混匀上述体系。于室温（20-30℃）反应5min。
【注】：连接反应不可于冰上进行。反应时间不要超过5min，一般1-2min即可完成连接反应，得到足够的重组子。
3）全量10ml加入100ml感受态细胞，轻轻混匀，室温放置5min。
【注1】：也可取5ml连接液，加入50ml感受态细胞中（加入体积不超过感受态细胞体积的1/10)。
【注2】：通常使用商品化的感受态细胞不需要冰浴和热休克、室温放置5min便可获得足够多转化子，如果感受态细胞效率较低时，可以按照冰浴热激的标准程序进行。
4）加300-500ml LB或者SOC培养基(不含抗生素)，37℃ 180 rpm振荡培养10min。
【注】：通常商品化的感受态细胞不超过2kb插入片段情况下，10min复苏可以得到足够多转化子，如果感受态效率低或者插入片段长转化子少的情况下可以提高复苏时间到30-60min以得到更多的转化子。
5） 取200ml菌液涂板（含氨苄抗性的LB或SOC固体培养基），培养过夜（如果预计转化子少，为得到较多克隆，4000 rpm 离心1min，吸弃掉部分上清，保留100ml，轻弹悬浮菌体，取全部菌液涂板）。
6）转化子的筛选鉴定
① 菌液PCR鉴定；
② 质粒大小鉴定：挑取单克隆，抽提质粒后可根据质粒大小进行鉴定。
③ 酶切鉴定：根据克隆实验设计，选择合适的限制性内切酶进行鉴定。
④ 测序分析：可选测序引物序列如下
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：CAGGAAACAGCTATGACC
【注】：本制品阳性率相当高，一般情况下，阳性克隆率接近100%，只要是长出来的菌落正常（不是污染的杂菌，转化子数量也不算太少），基本就是阳性克隆，因此插入片段不超过2-3kb的情况下可以不用鉴定直接挑1-2个菌去测序。
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒yb1518 MGS 巨噬细胞生长因子 Macrophage Growth Supplement 50 ml
yb1519 KGS 角质细胞生长因子 Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1520 KGS-2 角质细胞生长因子（不含 BPE) BPE-free Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1521 KGS-acf 角质细胞生长因子（不含动物成分） Keratinocyte Growth Supplement-animal component free 5 ml
yb1522 MelGS 黑色素细胞生长因子 Melanocyte Growth Supplement 5 ml
yb1523 MelGS-2 黑色素细胞生长因子（不含TPA) TPA-free Melanocyte Growth Supplement 5 ml
yb1524 FGS 成纤维细胞生长因子 Fibroblast Growth Supplement 5 ml
yb1525 FGS-sf 成纤维细胞生长因子-sf Fibroblast Growth Supplement-sf 5 ml
yb1526 FGS-acf 成纤维细胞生长因子（不含动物成分） Fibroblast Growth Supplement-animal component free 5 ml
yb1527 FGS-2 成纤维细胞生长因子-2 Fibroblast Growth Supplement-2 5 ml
yb1528 TEpiCGS 扁桃体上皮细胞生长因子 Tonsil Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1529 OKGS 口腔角质细胞生长因子 Oral Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1530 CoEpiCGSS 结肠上皮细胞生长因子 Colonic Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1531 BEpiCGS 支气管上皮细胞生长因子 Bronchial Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1532 SAEpiCGS 小气道上皮细胞生长因子 Small Airway Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1533 SkMCGS 骨骼肌细胞生长因子 Skeletal Muscle Cell Growth Supplement 5 ml
yb1534 EpiCGS 上皮细胞生长因子 Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1535 EpiCGS-2 上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-2 5 ml
yb1536 EpiCGS-a 动物上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-animal 5 ml
yb1537 MCGS 肾系膜细胞生长因子 Mesangial Cell Growth Supplement 5 ml
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文献和实验相关实验
Cloning vector to 1ml of the Taq-amplified PCR product2. Incubate for 5 minutes on your bench top3. Transform One Shot® Competent E. coli.Topo平端克隆方法和长PCR片断克隆法（Zero Blunt Topo PCR Cloning Kit）（Topo XL PCR Cloning Kit）因为越来越多高确限度热稳定酶如Pfx、Pfu被用于PCR扩增，使到PCR
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PCR Cloning Kit） Zero Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法，但载体和Topo平端的一样，含ccdB基因，所以同样可降低菌落背景，易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification EnzymeApplication of Cloned PCR ProductLigation MethodProductAdvantagesCat. No.Taq DNA Polymerase•Sequencing
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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