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上海乔羽生物科技有限公司
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25支/包,20包/箱
Corning,15ml离心管(不带托架),无菌包装数量:库存
货号:QY-EF430791
规格:25支/包,20包/箱
品牌:美国/corning
Corning,15ml离心管(不带托架),无菌包装管体半透明、亮白,管壁液体流动性理想,易控性强
可用于液氮环境
管身纤细柔软,可弯曲,方便出入微量或特殊容器
小吸头可保证滴量的可重复性
加长尖部易于较深容器的操作
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文献和实验今天霸霸带大家学习细胞转染的两种方法:脂质体法与磷酸钙沉淀法。实验原理外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。这里以脂质体介导法为例说明。脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞。利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。脂质体法实验操作☞ 材料准备1. 试剂:293
Buffer R-A,适当匀浆后收集合并到1.5ml 离心管。 (d)用带4~6 号针头的1ml 注射器反复吸注10次。 匀浆充分与否是决定RNA 和DNA 得率的关键。匀浆完全时,溶液不再粘稠,很容易从注射器针头上呈不连续滴状滴落,而非连续状。 2.吸取0.4ml 匀浆液转入另一1.5 ml 离心管中,若匀浆体积不足 0.4ml,加Buffer R-A 补充至0.4ml。 3.加0.15ml Buffer R-E,盖紧离心管,旋涡振荡混合均匀或或用步骤1 中使用的注射器反复吸注2~3次
可以采取现在比较常用的TRIzol一步法。不要使用带柱子的RNA提取试剂盒,因为除了专门用于提取miRNA的试剂以外,绝大部分柱子无法捕获20nt左右的miRNA。 2、电泳 (1)配制15%的尿素变性PAGE胶,可以先用预冷的0.5XTBE缓冲液作为电泳缓冲液,60V预跑30min。 (2)将样品与RNA loading buffer按比例混合,70℃预热5min,立即放置冰上。 (3)上样前,用缓冲液冲洗点样孔,防止点样孔中的杂质影响电泳。 (4)点样时,使样品均匀铺在点样孔底部
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