2×Hieff™ Long PCR Master Mix (

2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye)产品描述

2×HieffTM Long PCR Master Mix (With Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’→5’外切酶活性（校对活性）的蛋白组成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合独特的缓冲体系，Long Taq DNA Polymerase可从人基因组模板中扩增长达15 kb的片段。
Mix中含有电泳缓冲液和溴酚蓝染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。
2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye)产品组分



组 分

产品编号/规格

10108ES03(1 ml)

10108ES08（5×1 ml）

2×HieffTM Long PCR Master Mix (With Dye)

1ml

5×1ml

超纯水（PCR Grade）

1ml

5×1ml

运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增dystrophin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 Kb条带。

2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye)

应用实例

1. 反应体系配制：

ddH2O

Up to 50 μl

2×HieffTM Long PCR Master Mix(With Dye)

25 μl

模板DNA*

optional

引物1(10 μM)

2 μl

引物2(10 μM)

2 μl

*不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

人基因组DNA

0.1～1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10～100 ng

λDNA

0.5～5 ng

质粒DNA

0.1～10 ng

2. PCR反应条件设置：
目的片段＜5 kb

94℃

5 min(预变性)

94℃

30 sec

35个循环

55℃*

30 sec

72℃

30 sec/kb

72℃

7 min（彻底延伸）

*退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

目的片段＞5 kb

94℃

1-3 min(预变性)

94℃

10 sec

35个循环

68℃*

30-60 sec/kb

68℃

7 min（彻底延伸）

*对于> 5 kb的片段，推荐使用长引物，Tm值在68-70℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。

2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye)yb-axbz-218 小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3) PA12 规格25毫升/株.
yb-axbz-219 小鼠血细胞 WEHI-3 规格25毫升/株.
yb-axbz-220 小鼠红白血病细胞 MEL 规格25毫升/株.
yb-axbz-221 兔主动脉平滑肌细胞 SMC 规格25毫升/株.
yb-axbz-222 小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素) AtT-20 规格25毫升/株.
yb-axbz-223 小鼠骨髓瘤细胞 Fox-NY 规格25毫升/株.
yb-axbz-224 兔主动脉平滑肌细胞 CCC-SMC-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-225 兔主动脉平滑肌细胞 CCC-SMC-2 规格25毫升/株.
yb-axbz-226 大鼠垂体瘤细胞 MMQ 规格25毫升/株.
yb-axbz-227 小鼠原B细胞株 BaF3 规格25毫升/株.
yb-axbz-228 小鼠脑瘤细胞 BC3H1 规格25毫升/株.
yb-axbz-229 大鼠小肠隐窝上皮细胞 IEC-6 规格25毫升/株.
yb-axbz-230 猪肾细胞 LLC-PK1 规格25毫升/株.
yb-axbz-231 小鼠胚胎成纤维细胞 3T6-Swiss albino 规格25毫升/株.
yb-axbz-232 小鼠成纤维细胞 C3H 10T1/2 2A6 规格25毫升/株.
yb-axbz-233 小鼠树突状细胞肉瘤细胞 DCS 规格25毫升/株.
yb-axbz-234 大鼠肝细胞 IAR20 规格25毫升/株.
yb-axbz-235 新生牛眼晶体上皮细胞 NBLE 规格25毫升/株.
yb-axbz-236 新生牛眼Tenon＇s囊成纤维细胞 NBTF 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-axbz-237 兔角膜后基质层成纤维细胞 RCBBF 规格25毫升/株.
yb-axbz-238 兔角膜前基质层成纤维细胞 RCFBF 规格25毫升/株.
yb-axbz-239 大鼠气管上皮细胞 RTE 规格25毫升/株.
yb-axbz-240 兔眼Tenon＇s囊成纤维细胞 RYTF 规格25毫升/株.
yb-axbz-241 小鼠乳腺癌细胞 CCC-Ca761-03 规格25毫升/株.