MTT 噻唑兰

MTT 噻唑兰产品描述

噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞的活力，细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于：MTT是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶，而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来，酶标仪下测定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比，用以评估细胞存活状况。

MTT也可用作免疫组化/细胞化学染色试剂，也可用来检测NAD。MTT被快速还原成甲臜后，能够螯合镍，铜和钴。钴螯合物可参与机体氧化系统。

MTT 噻唑兰产品性质

中文别名（Chinese synonym）

溴化噻唑蓝四氮唑；

3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑蓝；

英文别名（English synonym）

3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide;

Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide;

Thiazoyl blue tetrazolium bromide;

CAS号（CAS NO.）

298-93-1

分子式（Formula）

C18H16N5SBr

外观（Appearance）

淡黄色至橙色粉末

分子量（Molecular weight）

414.3

纯度（purity）

≥98%

熔点（Melting point）

187℃

溶解性（Solubility）

溶于水，甲醇

结构式（Structure）


运输和保存方法

冰袋运输。4℃避光干燥保存。

注意事项

1) 溶解甲臜的有机溶剂具有毒性，使用时注意防护。

2) MTT有致癌性，应小心操作；MTT溶液需要无菌，因其对菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超过1周，因其可能发生降解，导致检测结果错误。

3) MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内。

4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

MTT 噻唑兰使用方法（以96孔板为例）

细胞生长的培养条件会影响检测检测，因此进行MTT检测时需考虑这些条件，包括：培养时间，传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况，48-72h培养时间下，最初铺板的细胞密度可控制在5000-10,000/孔。

注：最终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下。也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。

A．工作液配制

1） MTT溶液

生化研究中，常配制成5mg/mL的储备液。MTT最好现配现用，可以称取MTT 0.5g，溶于100 mL的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，4℃ 避光短时间保存。建议小剂量分装放到-20℃长期保存，避免反复冻融。

2） SDS-HCl溶液（MTT终止液）

取10ml 0.01 M HCl加入1g SDS，颠倒混匀或者超声使其完全溶解，此时即为终止液。建议现配现用。

B．MTT细胞增殖检测

1） 接种细胞：用含10%胎牛血清（FBS）的培养液配制成单个细胞悬液，调整细胞密度，以每孔5000-10, 000个细胞接种到96孔板，每孔体积100µl，培养板的边缘孔用无菌PBS填充。设置空白对照孔（不含有细胞）。

2） 37℃，5% CO2，培养24-72h。

3） 可选：对于贴壁细胞，去除旧的培养液，更换100µl/孔新鲜的培养液（不含酚红）；对于悬浮细胞，离心96孔板，去除尽可能多的上清液。然后加入 100µl/孔新鲜的培养液（不含酚红）重悬细胞；

4） 每孔加入10µl MTT溶液（5 mg/ml），加样时尽量勤换枪头，控制加量误差。

5） 水平摇床上低速混匀1 min后，放入37℃培养箱孵育4h。注：对于高密度的细胞（>100,000 cells/孔）可缩短孵育时间至2h。

6） 对于贴壁细胞，直接吸掉旧的培养液，避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞，离心收集细胞，去除培养液。

7） 加入100µl/孔SDS-HCl溶液，用枪充分混匀后放入37℃培养箱孵育4 h。注：更长的孵育时间会降低检测灵敏度。

8） 孵育结束，放置在酶标仪上摇匀后，选择570nm，测定吸光度。记录结果，比色以空白调零。

注：对于细胞毒性检测，以未经药物处理细胞的OD值为100%，然后计算药物处理细胞所占的比率（x），公式如下：OD（未处理细胞）/OD（药物处理细胞）=100%/x。然后建立直方图。
MTT 噻唑兰yb0110 小鼠脂肪细胞,L13T3细胞
yb0111 小鼠脂肪细胞,3T3-L1细胞
yb0112 小鼠正常肝细胞,NCTC1469细胞
yb0113 小鼠杂交瘤细胞CD25 PC61细胞
yb0114 小鼠杂交瘤细胞,ST2/o细胞
yb0115 小鼠原成骨细胞,MC3T3-E1 Subclone 14细胞
yb0116 小鼠原B细胞株 BaF3细胞
yb0117 小鼠胰腺腺泡细胞癌细胞,MPC-83细胞
yb0118 小鼠胰腺癌细胞,LTPA细胞
yb0119 小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞,Beta-TC-6细胞,
yb0120 小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原） NIT-1细胞
yb0121 小鼠胰岛素瘤β细胞,NIT-1β细胞,
yb0122 小鼠胰岛内皮细胞,MS1细胞,
yb0123 小鼠胰岛β细胞株 Min6细胞
yb0124 小鼠血细胞,WEHI-3细胞
yb0125 小鼠血管瘤内皮细胞,EOMA细胞,
yb0126 小鼠小胶质细胞,BV2细胞
yb0127 小鼠胃癌细胞,MFC细胞,
yb0128 小鼠网织细胞肉瘤 M5076细胞
yb0129 小鼠饲养层上皮细胞,HPT-8细胞
yb0130 小鼠树突状细胞肉瘤细胞,DCS细胞
yb0131 小鼠树突状细胞,DC2.4细胞,
yb0132 小鼠视网膜神经节细胞株细胞,RGC-5细胞
yb0133 小鼠肾足细胞,Mouse podocyte细胞
yb0134 小鼠肾小球系膜细胞,SV40 MES13细胞,
yb0135 小鼠肾小球系膜细胞,MES-13细胞
yb0136 小鼠肾腺癌细胞,RAG细胞,