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- 2025年10月28日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海古朵生物有限公司
- 检测范围：
科研
- 检测方法：
酶联检测
- 适应物种：
小鼠
- 规格：
48T/96T
表面膜免疫球蛋白AELISA
货号：GD-NB3016
规格:48T/96T
运输条件:2-8℃低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。
待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等。
表面膜免疫球蛋白AELISA操作步骤：
1）取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2）分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
3）标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
4）加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
5）温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。
7）加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
8）温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9）洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。
10）显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
11）终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
12）读板：在450nm波长读取各孔的OD值。
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文献和实验； （9）取细胞沉积物用Y计数器测cpm值； （10）用热变性IgG40ug溶于50uL新鲜混合人血清中，然后倍比稀释成10个稀释度，按上述方法操作测定cpm。 3、结果判断 以热聚合IgC的含量为横坐标，cpm为纵坐标绘制标准参考曲线。自参考曲线查出IC中IgC的ug数，按ug/mL报告。 4、注意事项 （1）Raji细胞有时也带有Pc受体和表面膜免疫球蛋白，为使实验结果反映真实情况，应预试条件，同时在实验中加阴性对照。 （2）用热变性IsC作对照和参考时，一定要用新鲜血清作稀释剂，以补充补体
骨髓是B细胞的发源地，同时也是哺乳动物B细胞分化成熟的中枢免疫器官。在骨髓内环境的作用下，按既定遗传顺序，从骨髓干细胞、前B细胞、未成熟B细胞，最终分化为成熟B细胞。其中经历了免疫球蛋白基因的重排、基因活化、转录表达等过程，最终出现特有的表面标志――B细胞抗原受体(BCR)。BCR也称表面膜之吱球蛋白(mlg)。成熟的B细胞能识别抗原，介导特异性免疫应答，具有合成、分泌抗体的潜能。 B细胞分化、成熟和抗原诱导的关系 1．前B细胞 在分化早期，Ig的重链--bt链的V区基因
2有补体结合点，CH5能固定组织细胞，CH3和CH4还参加Ⅰ型变态反应。免疫学中常用木瓜酶和胃蛋白酶。 5. 免疫球蛋白的血清型有：同种型（正常个体都有）同种异型（只存在同种的某些个体中）独特型（某一个体独有的。独特性网络在免疫应答的调控中起重要作用）。 6. 天然IgG分子无活性。IgM（五聚体，天然凝集素和冷凝集素，是B细胞膜上主要表面膜Ig）激活补体能力最强，IgG（单体，电泳最慢，再次免疫应答的主要抗体）至少要两分子。0.1mol/L 2巯基乙醇能破坏IgM但不破坏IgG，可以区分
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