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上海信裕
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)产品描述
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒（Alexa Fluor 647）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入Alexa Fluor 647-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。Alexa Fluor 647为红色荧光染料，具有很高的稳定性和很强的亮度。
本试剂盒应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
产品组分
组分
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)产品编号/规格
40308ES20（20T）
40308ES50（50T）
40308ES60（100T）
5×Equilibration Buffer
1.25 ml
1.25 ml×2
1.25 ml×3
Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix
100 μl
250 μl
250 μl×2
Recombinant TdT Enzyme
20 μl
50 μl
50 μl×2
Proteinase K(2 mg/ml)
40 μl
100 μl
100 μl×2
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。
本试剂盒储存在-20℃，Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix避光储存于-20℃，保质期为一年。
操作步骤
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)一、样品准备
A． 石蜡包埋组织切片
1.室温下将石蜡组织切片放入二甲苯中浸泡5min，重复一次，以彻底脱掉石蜡。
2.室温下用100%乙醇浸泡切片5min，重复一次。
3.室温下用梯度乙醇（90、80、70%）各浸洗1次，每次3min。
4.用PBS轻轻润洗切片，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。
5.按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液，使其终浓度为20μg/ml。
6.每个样本上滴加100μl浓度为20μg/ml的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育20min。注意：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。
7. 用PBS溶液润洗样本，轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。
B． 组织冰冻切片
1.将玻片浸没在4%多聚甲醛溶液（溶于PBS）中固定，室温下孵育15min。
2.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。
3.将玻片浸没在PBS溶液中，室温孵育15min。
4.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。
5.按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液，使其终浓度为20μg/ml.
6.每个样本上滴加100μl浓度为20μg/ml的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育10min。注意：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。
7. 用PBS溶液润洗样本2-3次。
8.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。
C． 细胞爬片的准备
在Lab-Tek载波片小室（Chamber Slides）上培养贴壁细胞。在凋亡诱导处理之后，用PBS洗2遍载玻片。
D． 细胞涂片的制备（以多聚赖氨酸包被的载玻片为例）
1.以约2×107个细胞/ml的浓度将细胞重悬于PBS中，吸取50-100μl细胞悬液滴于多聚赖氨酸包被的载玻片上，用一片干净的载玻片轻柔的涂开细胞悬液。
2.固定细胞，将载玻片浸入装有4%新鲜配制于PBS中的多聚甲醛的染色缸中，在4℃放置25min。
3.洗涤载玻片，将其浸入PBS中，室温放置5min。重复用PBS洗一次。
4.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。
5.按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液，使其终浓度为20μg/ml。
6.每个样本上滴加100μl浓度为20μg/ml的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育5min（也可浸于0.2%配制于PBS中的Triton X-100溶液中，室温孵育5min进行通透处理）。注意：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。
7.用PBS溶液润洗样本2-3次。
8.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)二、DNA酶处理阳性对照的步骤
在样本通透处理后，用DNA酶I处理细胞来准备阳性对照载玻片。该流程通常会引起被处理的大多数细胞显现绿色荧光。
注意：DNA酶I处理固定的细胞会引起染色体DNA的断裂，产生许多可标记的DNA 3’-末端。
1.加入100μl DNA酶I缓冲液到固定的细胞中，室温孵育5min。
2.轻叩掉液体，加入100μl含5.5-10 units/ml DNA酶I的缓冲液，室温孵育10min。
3.轻叩载玻片去掉多余的液体，并将载玻片在装有去离子水的染色缸中彻底洗3-4次，该染色缸是专门用于阳性对照的。注意：阳性对照载玻片必须使用单独的染色缸，否则，来自阳性对照载玻片上残余的DNA酶I活性可能会在实验载玻片上引入高的背景。
三、标记与检测
1.按1:5的比例用去离子水稀释5×Equilibration Buffer。
2.每个样本滴加100μl 1×Equilibration Buffer使其全部覆盖待检样本区域，室温孵育10-30分钟。或者将载玻片放入一个含有 1×Equilibration Buffer的缸中，保证缓冲液没过样本。在平衡细胞的同时在冰上解冻Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix，并且依照表1，准备足够量的用于所有实验的和可选阳性对照反应的TdT孵育缓冲液。对于面积小于5cm2的一个标准反应，其体积是50μl，用50μl乘以实验和阳性对照反应的数目来确定所需TdT孵育缓冲液的总体积。对于表面积更大的样本，可成比例的增大试剂体积。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)
xy1280 RPC 大鼠垂体细胞 Rat Pituitary Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1281 RMC 大鼠脑膜细胞 Rat Meningeal Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1282 RN-r 大鼠脑脊神经元 Rat Neurons-raphe 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1283 RN-c 大鼠皮质神经元 Rat Neurons-cortical 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1284 RGC 大鼠颗粒细胞 Rat Granule Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1285 RN-h 大鼠海马趾神经元 Rat Neurons-hippocampal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1286 RN-sn 大鼠黑质神经元 Rat Neurons-substantia nigra 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1287 RN-s 大鼠纹状体神经元 Rat Neurons-striatal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1288 RN-vsc 大鼠腹脊髓神经元 Rat Neurons-ventral spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1289 RN-dsc 大鼠背脊髓神经元 Rat Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1290 RN-sc 大鼠背脊髓神经元 Rat Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1291 ROPC 大鼠少突胶质前体细胞 Rat Oligodendrocyte Precursor Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1292 ROPC-f 大鼠少突胶质前体细胞-新鲜 Rat Oligodendrocyte Precursor Cells-fresh 1 x 10^6 cells/tube ATCC
xy1293 RSC 大鼠雪旺细胞 Rat Schwann Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1294 RPNF 大鼠神经束膜细胞 Rat Perineural Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1295 RA 大鼠星形胶质细胞 Rat Astrocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1296 RA-c 大鼠小脑星形胶质细胞 Rat Astrocytes-cerebellar 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1297 RA-h 大鼠海马趾星形胶质细胞 Rat Astrocytes-hippocampal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1298 RM 大鼠小胶质细胞 Rat Microglia 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1299 RMa-bm 大鼠巨噬细胞 Rat Macrophage 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1300 REK-n 大鼠表皮角质细胞-新生 Rat Epidermal Keratinocytes-neonate 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1301 RDF-n 大鼠皮肤成纤维细胞 - 新生 Rat Dermal Fibroblasts - neonate 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1302 RDF-a 大鼠皮肤成纤维细胞-成年 Rat Dermal Fibroblasts-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1303 RLF 大鼠淋巴成纤维细胞 Rat Lymphatic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1304 RPAEpiC 大鼠肺泡上皮细胞 Rat Pulmonary Alveolar Epithelial Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1305 RPF 大鼠肺成纤维细胞 Rat Pulmonary Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1306 RRTEpiC 大鼠肾小管上皮细胞 Rat Renal Tubular Epithelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1307 RRMC 大鼠肾系膜细胞 Rat Renal Mesangial Cells 5 x 10^5 cells per 1ml ATCC
xy1308 RHSteC 大鼠肝星状细胞 Rat Hepatic Stellate Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1309 RHMa 大鼠肝巨噬细胞 Rat Hepatic Macrophage 1x10^6 cells/vial ATCC
xy1310 RASMC 大鼠主动脉平滑肌细胞 Rat Aortic Smooth Muscle Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1311 RCM 大鼠心肌细胞 Rat Cardiac Myocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒（Alexa Fluor 647）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入Alexa Fluor 647-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。Alexa Fluor 647为红色荧光染料，具有很高的稳定性和很强的亮度。
本试剂盒应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
产品组分
组分
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)产品编号/规格
40308ES20（20T）
40308ES50（50T）
40308ES60（100T）
5×Equilibration Buffer
1.25 ml
1.25 ml×2
1.25 ml×3
Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix
100 μl
250 μl
250 μl×2
Recombinant TdT Enzyme
20 μl
50 μl
50 μl×2
Proteinase K(2 mg/ml)
40 μl
100 μl
100 μl×2
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。
本试剂盒储存在-20℃，Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix避光储存于-20℃，保质期为一年。
操作步骤
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)一、样品准备
A． 石蜡包埋组织切片
1.室温下将石蜡组织切片放入二甲苯中浸泡5min，重复一次，以彻底脱掉石蜡。
2.室温下用100%乙醇浸泡切片5min，重复一次。
3.室温下用梯度乙醇（90、80、70%）各浸洗1次，每次3min。
4.用PBS轻轻润洗切片，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。
5.按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液，使其终浓度为20μg/ml。
6.每个样本上滴加100μl浓度为20μg/ml的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育20min。注意：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。
7. 用PBS溶液润洗样本，轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。
B． 组织冰冻切片
1.将玻片浸没在4%多聚甲醛溶液（溶于PBS）中固定，室温下孵育15min。
2.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。
3.将玻片浸没在PBS溶液中，室温孵育15min。
4.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。
5.按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液，使其终浓度为20μg/ml.
6.每个样本上滴加100μl浓度为20μg/ml的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育10min。注意：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。
7. 用PBS溶液润洗样本2-3次。
8.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。
C． 细胞爬片的准备
在Lab-Tek载波片小室（Chamber Slides）上培养贴壁细胞。在凋亡诱导处理之后，用PBS洗2遍载玻片。
D． 细胞涂片的制备（以多聚赖氨酸包被的载玻片为例）
1.以约2×107个细胞/ml的浓度将细胞重悬于PBS中，吸取50-100μl细胞悬液滴于多聚赖氨酸包被的载玻片上，用一片干净的载玻片轻柔的涂开细胞悬液。
2.固定细胞，将载玻片浸入装有4%新鲜配制于PBS中的多聚甲醛的染色缸中，在4℃放置25min。
3.洗涤载玻片，将其浸入PBS中，室温放置5min。重复用PBS洗一次。
4.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。
5.按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2mg/ml的Proteinase K溶液，使其终浓度为20μg/ml。
6.每个样本上滴加100μl浓度为20μg/ml的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育5min（也可浸于0.2%配制于PBS中的Triton X-100溶液中，室温孵育5min进行通透处理）。注意：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。
7.用PBS溶液润洗样本2-3次。
8.轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)二、DNA酶处理阳性对照的步骤
在样本通透处理后，用DNA酶I处理细胞来准备阳性对照载玻片。该流程通常会引起被处理的大多数细胞显现绿色荧光。
注意：DNA酶I处理固定的细胞会引起染色体DNA的断裂，产生许多可标记的DNA 3’-末端。
1.加入100μl DNA酶I缓冲液到固定的细胞中，室温孵育5min。
2.轻叩掉液体，加入100μl含5.5-10 units/ml DNA酶I的缓冲液，室温孵育10min。
3.轻叩载玻片去掉多余的液体，并将载玻片在装有去离子水的染色缸中彻底洗3-4次，该染色缸是专门用于阳性对照的。注意：阳性对照载玻片必须使用单独的染色缸，否则，来自阳性对照载玻片上残余的DNA酶I活性可能会在实验载玻片上引入高的背景。
三、标记与检测
1.按1:5的比例用去离子水稀释5×Equilibration Buffer。
2.每个样本滴加100μl 1×Equilibration Buffer使其全部覆盖待检样本区域，室温孵育10-30分钟。或者将载玻片放入一个含有 1×Equilibration Buffer的缸中，保证缓冲液没过样本。在平衡细胞的同时在冰上解冻Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix，并且依照表1，准备足够量的用于所有实验的和可选阳性对照反应的TdT孵育缓冲液。对于面积小于5cm2的一个标准反应，其体积是50μl，用50μl乘以实验和阳性对照反应的数目来确定所需TdT孵育缓冲液的总体积。对于表面积更大的样本，可成比例的增大试剂体积。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒( Alexa Fluor 647)
xy1280 RPC 大鼠垂体细胞 Rat Pituitary Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1281 RMC 大鼠脑膜细胞 Rat Meningeal Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1282 RN-r 大鼠脑脊神经元 Rat Neurons-raphe 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1283 RN-c 大鼠皮质神经元 Rat Neurons-cortical 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1284 RGC 大鼠颗粒细胞 Rat Granule Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1285 RN-h 大鼠海马趾神经元 Rat Neurons-hippocampal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1286 RN-sn 大鼠黑质神经元 Rat Neurons-substantia nigra 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1287 RN-s 大鼠纹状体神经元 Rat Neurons-striatal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1288 RN-vsc 大鼠腹脊髓神经元 Rat Neurons-ventral spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1289 RN-dsc 大鼠背脊髓神经元 Rat Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1290 RN-sc 大鼠背脊髓神经元 Rat Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1291 ROPC 大鼠少突胶质前体细胞 Rat Oligodendrocyte Precursor Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1292 ROPC-f 大鼠少突胶质前体细胞-新鲜 Rat Oligodendrocyte Precursor Cells-fresh 1 x 10^6 cells/tube ATCC
xy1293 RSC 大鼠雪旺细胞 Rat Schwann Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1294 RPNF 大鼠神经束膜细胞 Rat Perineural Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1295 RA 大鼠星形胶质细胞 Rat Astrocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1296 RA-c 大鼠小脑星形胶质细胞 Rat Astrocytes-cerebellar 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1297 RA-h 大鼠海马趾星形胶质细胞 Rat Astrocytes-hippocampal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1298 RM 大鼠小胶质细胞 Rat Microglia 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1299 RMa-bm 大鼠巨噬细胞 Rat Macrophage 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1300 REK-n 大鼠表皮角质细胞-新生 Rat Epidermal Keratinocytes-neonate 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1301 RDF-n 大鼠皮肤成纤维细胞 - 新生 Rat Dermal Fibroblasts - neonate 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1302 RDF-a 大鼠皮肤成纤维细胞-成年 Rat Dermal Fibroblasts-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1303 RLF 大鼠淋巴成纤维细胞 Rat Lymphatic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1304 RPAEpiC 大鼠肺泡上皮细胞 Rat Pulmonary Alveolar Epithelial Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
xy1305 RPF 大鼠肺成纤维细胞 Rat Pulmonary Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1306 RRTEpiC 大鼠肾小管上皮细胞 Rat Renal Tubular Epithelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1307 RRMC 大鼠肾系膜细胞 Rat Renal Mesangial Cells 5 x 10^5 cells per 1ml ATCC
xy1308 RHSteC 大鼠肝星状细胞 Rat Hepatic Stellate Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1309 RHMa 大鼠肝巨噬细胞 Rat Hepatic Macrophage 1x10^6 cells/vial ATCC
xy1310 RASMC 大鼠主动脉平滑肌细胞 Rat Aortic Smooth Muscle Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
xy1311 RCM 大鼠心肌细胞 Rat Cardiac Myocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
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文献和实验相关实验
的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡，其中 TUNEL 法做的最多，我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司，结果大多数成功，偶尔也有失败，下面我把实验中的关键问题与大家共享一下，同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内，在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合，再用 HRP 标记的链霉
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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