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上海信裕
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂一种经过优化的阳离子脂质体,适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染,对多数细胞具有很高的转染率。其独特的配方使其可以直接加入培养基中,血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不必立即除去转染剂,可在4~6小时后除去。
24 孔板转染每次用2μl左右,1ml Hieff TransTM 脂质体核酸转染试剂大约可做500 次24 孔板转染,或者大约100 次6孔板转染。
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。产品4ºC保存。
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂操作流程(以24孔板为例,其他培养板加样体积请参考表一)
1. 转染前一天,胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染日密度为90%。
2. 培养板内换成新鲜的正常生长的细胞培养基,每孔0.5ml,含血清,不含抗生素。
3. 对于每孔细胞,使用50μl 无血清培养基(如OPTI-MEMⅠ培养基)稀释0.8μg-1.0μg DNA。
4. 对于每孔细胞,使用50μl无血清培养基(如OPTI-MEMⅠ培养基)稀释1μl-3μl 脂质体核酸转染试剂试剂。脂质体核酸转染试剂稀释后保温5 分钟(在30 分钟内同稀释的DNA 混合,保温时间过长会降低活性。)
注意:即使脂质体核酸转染试剂使用OPTI-MEMⅠ稀释,细胞也可以使用D-MEM 培养。如果D-MEM 做为脂质体核酸转染试剂的稀释液,必须在5分钟内同稀释的DNA 混合。
混合稀释的DNA和稀释的脂质体核酸转染试剂。在室温保温20分钟。
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂注:混匀时不可Vortex或离心。溶液可能会混浊,但不会影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。
5. 直接将复合物加入到每孔中,摇动培养板,轻轻混匀。
注:如果在无血清条件下转染,使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基,替换为0.5ml无血清培养基。
6. 在37℃,5%的CO2中保温24-48 小时,无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5 小时后更换生长培养基,不会降低转染活性。
7. 在细胞中加入复合物24-72 小时后,分析细胞抽提物或进行原位细胞染色,检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达,在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中,两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
8. 对于96 孔板培养,不需要提前一天进行细胞铺板,可以直接在平板中制备复合物,然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了,这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H,293-F,COS-7L和CHO细胞的试验,同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得脂质体核
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂
xy-axbz-192 鲑鱼胚胎细胞 RTG 规格25毫升/株.
xy-axbz-193 大黄鱼肾细胞 PCK 规格25毫升/株.
xy-axbz-194 鼠腹水单核细胞瘤 J774A.1 规格25毫升/株.
xy-axbz-195 小鼠IL-3依赖性32D细胞 规格25毫升/株.
xy-axbz-196 大黄鱼EPC细胞 EPC 规格25毫升/株.
xy-axbz-197 菜青虫卵巢细胞 Pr-HNV8 规格25毫升/株.
xy-axbz-198 大鼠胰岛素细胞 INS-1 规格25毫升/株.
xy-axbz-199 小鼠淋巴结血管上皮样细胞 SVEC4-10 规格25毫升/株.
xy-axbz-200 小鼠肉瘤 S37 规格25毫升/株.
xy-axbz-201 小鼠乳腺 EMT6 规格25毫升/株.
xy-axbz-202 C3H小鼠骨肉瘤 LM8 规格25毫升/株.
xy-axbz-203 大鼠骨肉瘤 VMR106 规格25毫升/株.
xy-axbz-204 猴肾C M145 规格25毫升/株.
xy-axbz-205 兔成骨C IF 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
xy-axbz-206 小鼠白血病 L1210 规格25毫升/株.
xy-axbz-207 大鼠皮层神经元细胞 RN-c 规格25毫升/株.
xy-axbz-208 大鼠主动脉平滑肌细胞 RSMC 规格25毫升/株.
xy-axbz-209 小鼠小胶质瘤细胞 Bv-2 规格25毫升/株.
xy-axbz-210 鼠杂交骨髓瘤细胞 K6H6/B5 规格25毫升/株.
xy-axbz-211 大鼠脑膜细胞 RMC 规格25毫升/株.
xy-axbz-212 转基因细胞 3T3/Fas/com 规格25毫升/株.
xy-axbz-213 大鼠肝癌细胞 CRL-1548 规格25毫升/株.
xy-axbz-214 小鼠T淋巴细胞瘤细胞 Cyc-Tag(S49) 规格25毫升/株.
xy-axbz-215 小鼠骨髓细胞 FDC-P1 规格25毫升/株.
xy-axbz-216 小鼠垂体瘤细胞 GT1-1 规格25毫升/株.
xy-axbz-217 小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠胶质瘤细胞之融合细胞 NG108-15 规格25毫升/株.
xy-axbz-218 小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3) PA12 规格25毫升/株.
xy-axbz-219 小鼠血细胞 WEHI-3 规格25毫升/株.
xy-axbz-220 小鼠红白血病细胞 MEL 规格25毫升/株.
xy-axbz-221 兔主动脉平滑肌细胞 SMC 规格25毫升/株.
xy-axbz-222 小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素) AtT-20 规格25毫升/株.
xy-axbz-223 小鼠骨髓瘤细胞 Fox-NY 规格25毫升/株.
xy-axbz-224 兔主动脉平滑肌细胞 CCC-SMC-1 规格25毫升/株.
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文献和实验在各种苛刻条件下的密封性完好。无 DNA 酶,无 RNA 酶,无人类 DNA,无内毒素,外旋冻存盖特殊设计,无需密封垫圈,可避免垫圈可能对细胞产生慢性毒性。管体有清晰的白色容量刻度和书写区,方便使用和识别。脂质体核酸转染试剂HieffTransTM 脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂,适用于 DNA、RNA 和寡核苷酸的转染,对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中,血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去
基因的质粒转染。转染后第三天和第六天,表面 IgG 滴度用 Octet 测定。图示标明用 MegaTran 1.0 转染后,在第 3 天和第 6 天,表达水平增加 35-60%。4. 原代细胞系转染试剂-TurboFectin 8.0TurboFectin8.0 转染试剂是针对核酸转染真核细胞所优化的一种高效率的新型转染试剂,是一种脂质体和组蛋白的混合物,溶解在 80% 的乙醇中。适用于在各种不同的细胞类型中转染 TrueClone/TrueORF Clone(过表达)和 HuSH-29 表达
应用更为广泛的方法。 核酸转染技术 转染技术的目的是研究真核基因的表达和调控。目前的方法包括磷酸钙共沉淀法,电穿孔法以及同DEAE-dextran或阳离子脂质体试剂形成复合物法。在这些不同的方法中,DNA转导的效率,转导的机制,可重复性及使用的方便性都存在差异。而且,有效的DNA转导会伴随某些毒性或细胞抑制,程度依赖于试剂、步骤和目的细胞的不同而不同,因此建议每种技术都应优化以得到最佳结果。下面就对转染技术做简要叙述。 磷酸钙共沉淀 将氯化钙,DNA和磷酸缓冲液混合,沉淀
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