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上海钰博
人外周血白细胞完全培养基中已包含了高质量的血清和人外周血白细胞所需生长因子,可直接用于人外周血白细胞的培养。
注意事项:
1. 培养基为低温长途运输,收到后请先查看是否有漏液、破损或污染等,若出现问题请及时和我们联系。
2. 用75%的酒精擦拭瓶身,4℃保存。
A、 人外周血白细胞完全培养基划线获得单个菌落的方法。划不出单个菌落的原因:
(1) 平板上有过多的水分;
(2) 划线时接种环未经反复灼烧。
(3) 多区划线,三区或四区划线。
B、 人外周血白细胞完全培养基涂布和倾注的区别:
涂布利于观察,但由于涂布棒上会带有少量的菌液,影响计数的准确性。
涂布更为准确,但不利于观察菌落的状态。
C、 人外周血白细胞完全培养基培养基配制时应注意的问题:
(1)灭菌温度要严格控制,按照要求灭菌,尤其含糖量较高的培养基温度不应太高,过高会导致糖分焦化,影响质量。
(2)琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分。
(3)培养基不能反复灭菌,反复灭菌也会导致营养成分的破坏。
(4)含琼脂的培养基灭菌后,要摇匀。
D、 人外周血白细胞完全培养基平板的保存:大多数平板如VRBA、DC、、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。
E、 人外周血白细胞完全培养基产品的保存:
(1) 干粉培养基:避光干燥,结块后不能使用。
(2) 亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等:冷冻保存,使用时,要常温解冻,避免水浴加热。
(3) 抗生素类:冷藏保存,温度过高会导致灵敏度的下降。
(4) 兔血浆:冷藏保存少量的红色不会影响结果。
F、 人外周血白细胞完全培养基观察时间的掌握:按SN、GB等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察,时间过短或时间过长,单菌落的特征都不会很明显。如单增李斯特氏菌显色培养基,时间短单菌落看不到卵磷脂环,时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。OXA、PALCAM的观察也如此,时间过长,李氏菌使整个平板成黑色,不利于观察单个菌落。
BA/F3 小鼠原B细胞
BHK-21 金黄地鼠肾
BS-C-1 非注洲绿猴肾
C2C12 小鼠成肌细胞
C3H 10T1/2 2A6 小鼠成纤维细胞
CHOdhfr 二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞
CHO-K1 中国仓鼠卵巢细胞
COS-1 非洲绿肾
COS-7 非洲绿猴肾细胞
CV-1 猴肾细胞
IAR20 小鼠肝细胞
IEC-6 大鼠小肠隐窝上皮细胞
LL-PK1, 猪肾细胞
MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨细胞
MDCK 狗肾细胞
MEF 小鼠胚胎成纤维细胞
NIH3T3 小鼠胚胎成纤维细胞
P815 小鼠肥大细胞
PA12 小鼠成纤维细胞
RTE 大鼠气管上皮细胞
SF9 昆虫卵巢细胞
SMC 兔主动脉平滑肌细胞
Vero 猴肾细胞
WEHI-3 小鼠血液细胞
Y2 小鼠成纤维细胞
L6 大鼠骨骼肌成肌细胞
NRK 小鼠结缔组织细胞
AtT-20 小鼠垂体瘤
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文献和实验一、自然沉降法 人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000~1000:1,两类细胞的沉降速度不同,据此加以分离。自然沉降法是利用红细胞自然沉降率较快加以分离。该法简便易行,对细胞损伤少,但纯度差。 [试剂及配制] (1)无Ca2+、Mg2+,Hank’s液 (2)含10%~20%灭活小牛血清Hank’s液 [操作方法] (1)取静脉血2ml,放入加有抗凝剂的试管中,轻轻混匀; (2)将试管直立静置于室温或37℃
正常人外周血白细胞的分离 一、自然沉降法 正常人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000~1000:1,两类细胞的沉降速度不同,进行正常人外周血白细胞分离。 1 、试剂及配制 1)无Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液。 2)含10%~20% 灭活小牛血清Hank’s液。 2 、操作方法 1)取静脉血2ml,放入加有抗凝剂的试管中,轻轻混匀。 2)将试管直立
指培养细胞时,具备可使其最大限度地生长和繁殖的条件,而含有满足各种营养缺陷突变型要求的培养基。其组成可按生物种类和目的而异,但一般是由酵母浸膏、麦芽汁、牛肉膏、蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白氨基酸等营养物中选几种营养物配合而成。完全培养基用于短期内无性增殖大量细胞,以及分离和增殖营养缺陷突变型。
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