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上海钰博
成 分:不含酚红,含2.5g/L胰酶(1:250)溶于PBS溶液,不含钙镁
保存条件:-20℃保存
使用说明:用于细胞培养,不用于诊断和治疗
A、 0.25%胰酶(溶于PBS)划线获得单个菌落的方法。划不出单个菌落的原因:
(1) 平板上有过多的水分;
(2) 划线时接种环未经反复灼烧。
(3) 多区划线,三区或四区划线。
B、 0.25%胰酶(溶于PBS)涂布和倾注的区别:
涂布利于观察,但由于涂布棒上会带有少量的菌液,影响计数的准确性。
涂布更为准确,但不利于观察菌落的状态。
C、 0.25%胰酶(溶于PBS)培养基配制时应注意的问题:
(1)灭菌温度要严格控制,按照要求灭菌,尤其含糖量较高的培养基温度不应太高,过高会导致糖分焦化,影响质量。
(2)琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分。
(3)培养基不能反复灭菌,反复灭菌也会导致营养成分的破坏。
(4)含琼脂的培养基灭菌后,要摇匀。
D、 0.25%胰酶(溶于PBS)平板的保存:大多数平板如VRBA、DC、、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。
E、 0.25%胰酶(溶于PBS)产品的保存:
(1) 干粉培养基:避光干燥,结块后不能使用。
(2) 亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等:冷冻保存,使用时,要常温解冻,避免水浴加热。
(3) 抗生素类:冷藏保存,温度过高会导致灵敏度的下降。
(4) 兔血浆:冷藏保存少量的红色不会影响结果。
F、0.25%胰酶(溶于PBS)观察时间的掌握:按SN、GB等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察,时间过短或时间过长,单菌落的特征都不会很明显。如单增李斯特氏菌显色培养基,时间短单菌落看不到卵磷脂环,时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。OXA、PALCAM的观察也如此,时间过长,李氏菌使整个平板成黑色,不利于观察单个菌落。
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文献和实验olivial 最近想用western blot检测小胶质细胞活化后细胞内p-Akt表达情况(包括时间点),那么提蛋白时可否用胰酶消化的方法?加药前是否要将完全培养液换成无血清培养液? ylhuang0502 Q1. 提蛋白时可否的方法? A1.: 不要用胰酶消化, 贴壁细胞处理后,立刻至于冰上,用PBS洗三次后,直接加lysis buffer裂解提蛋白,lysis buffer的组分可查查文献,或在本版搜一下。
胰酶 pancreatin 为从牛和猪的胰脏中提取的粗酶的总称,其中含有胰蛋白酶( Trypsin)、脂肪酶( lipase)、淀粉酶( amylase)、麦芽糖酶( maltase)和核酸酶( nuclease)等。
园 丁香园网友tony999的观点: PBS类似于临床上用的生理盐水,离子浓度恐怕不能随意变动吧,我们培养细胞用的pbs配方是:Nacl 8.5g,Kcl 0.2g,Na2HPO4(12H2O) 2.58g,KH2PO4 0.27g,溶于1000ml双蒸水中,用时需灭菌 此溶液ph值是7.2 丁香园网友琴逢笛手的问题: 0.1M的PBS和0.01M的PBS有什么不同?这个浓度指的是磷酸根的摩尔浓度吗?同样是平衡盐溶液,浓度相差10倍在应用上有什么不同吗? 丁香园网友welcome2008
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