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    EnoGene Cell Counting Kit-8 (CCK-8)细胞活力检测试剂盒

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    EnoGene Cell Counting Kit-8 (CCK-8)细胞活力检测试剂盒

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    • 货号: DM-CSH2053
      供应商: 上海笃玛生物科技有限公司
      数量: 现货
      保质期: 有效期一年
      保存条件: 4℃
      规格: 100T
      检测原理
      Cell Counting Kit简称CCK试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
      WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan) 。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。
      CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
      保存条件:
      4℃干燥避光保存,有效期一年(推荐)。-20℃干燥避光保存,有效期二年。


      CCK试剂盒操作说明
      . 制作标准曲线(测定细胞具体数量)
      1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
      2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
      3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
      细胞活性检测
      1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。
      2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
      3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
      4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
      5、OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
      细胞增殖-毒性检测
      1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。
      2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
      3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
      4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
      5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
      6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
      7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
      注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
      Note
      1)建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
      2)有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
      3)白细胞可能需要培养较长时间。
      4)当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
      5)如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
      6)培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
      活力计算:
      细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
      A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
      A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
      A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
       
      温馨提示:不可用于临床治疗。

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