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上海钰博
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上皮样
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干冰运输
- 生长状态:
贴壁生长
一、原代细胞服务:
各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源
多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源
原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等
原代细胞相关技术服务及整体实验外包服务
二、细胞系服务:
细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书
细胞系培养过程的技术指导
细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等
三、iPS细胞服务:
iPS细胞基础培养(有滋养层or无滋养层)
iPS细胞增殖及冷冻保存
iPS基础培养技术实习
新药及实验仪器上市前评估
四、其他技术外包服务、客户定制服务等
上海钰博生物科技有限公司具体细胞信息可以参考 : www.shybio.cn




细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备D-MEM/F-12培养基( DMEM/F12(1:1)(GIBCO, 12400024):Ham’s F12/DME Medium(DME-H/F-12 50%Mixture w/o HEEPS,with NEAA Medium(GIBCO,11140-050)) 5%HS + 2.5%FBS。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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文献和实验anyi63 wrote: 我们用的是h9c2细胞株,细胞系是细胞株50代以后遗传突变带癌细胞特点,有可能在培养条件下无限传下去 你好,请问您能简单介绍一下这个细胞株的特点吗?我想用它做免疫实验请问可以吗? zgjun 我也想知道H9C2细胞株的特点,请赐教。。 songjianyue 你好,请问这个问题最后是怎么解决的? 离离草 博凌科为解答:首先,它肯定不同
体提取实验。 6、细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取? 会的。在收获细胞时,应确定死亡细胞占比不超过 5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量囊泡,它们在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体,同时易堵塞 EPF 纯化柱。 7、准备做细胞外泌体 Small RNA 的 NGS 测序,初始样品量需要准备多少? 普通肿瘤细胞系推荐使用 50mL 以上的初始样品量。由于某些细胞(如悬浮细胞、干细胞、免疫细胞、神经细胞等)中外泌体含量比较低,建议先通过 10 kD~ 100 kD 的超滤
细胞,从而诱导细胞产生适应性免疫反应。HEK293 细胞因其高转染效率、易于培养和大量产生外泌体的能力,作为外泌体供体被广泛应用于各种研究。与干细胞相比,HEK293 细胞系的大规模培养条件相对完善、技术更加成熟。尽管最初的 HEK293 细胞系是一个贴壁细胞系,但研究人员通过驯化已经建立了许多能够进行悬浮培养的HEK293 衍生的细胞系, 如 HEK293S、HEK293F 等。此外,HEK293 还被广泛应用于生物药物的生产,对该细胞系使用最常见的转染试剂能够表现出高转染效率,同时该细胞系生长速率高
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