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上海笃玛生物科技有限公司
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体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等
48T/96T
规格: | 48T | 产品价格: | ¥800.0 |
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规格: | 96T | 产品价格: | ¥1680.0 |
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒
优势订购:abcam novus cst sigma ABD ABI santa RD DSHB GeneTex Invivogen Active Biolegend Exqion bio-rad thermo 等进口品牌
常备现货:Trizol lip2000 lip3000 DMSO
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒
常规生物试剂:甘氨酸 牛血清白蛋白V 西班牙琼脂糖 DTT 蛋白酶K 脱落酸ABA 咪唑 硫酸卡那霉素 脂多糖 精氨酸 谷氨酰胺 TRIS DMSO 植物凝胶 胶原酶I II IV
胃蛋白酶1:10000 等试剂
德国艾本德,国产大龙移液器,电动助吸器
Axygen耗材:吸头 T-300 T-200-Y T-1000-B,
T-300-R-S T-200-Y-R-S T-1000-B-R-S
离心管MCT-150-C MCT-200-C
PCR-0208-C 0.2ml八连排管
康宁耗材:细胞培养板 ,细胞培养皿,细胞培养瓶,细胞刮刀
伯乐bio-rad 耗材,胰酶,双抗,胎牛血清,四季青血清
Hyclone/Gibco培养基: DMEM高糖,1640,MEM,PBS
Trizol RNA提取试剂盒 脂质体2000/3000
CCK8试剂盒,MP土壤试剂盒,BD脱脂奶粉
密理博ECL发光液,滤器,超滤管,PVDF膜 ,
GE尼龙膜 PALL NC膜66485,
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒
规范操作流程
在使用酶联免疫检测试剂盒时,要按照说明书上的操作流程进行规范操作。一般来说,操作流程包括以下几个步骤:样品处理、加样、孵育、洗涤、显色、比色等。要确保每个步骤都按照要求进行操作,避免出现误差或污染等情况。
注意实验安全
在进行酶联免疫检测时,要注意实验安全。一些实验操作可能会涉及到危险物质或微生物等,因此要遵守实验室安全规范,正确使用防护用品和器材。同时,对于一些具有的样品或试剂,要按照相关规定进行操作和处理,避免污染环境和危害人员健康。
做好数据处理和分析工作
使用酶联免疫检测试剂盒时,要做好数据处理和分析工作。对于获得的实验数据要进行统计和处理,确保数据的准确性和可靠性。同时,还要对数据进行深入的分析和解释,为实验结果提供科学的依据和结论。
总之,使用酶联免疫检测试剂盒时需要注意很多细节问题。只有做好每个环节的工作才能保证获得准确的检测结果。因此,在使用过程中要认真阅读说明书并按照要求进行操作同时注意安全和数据处理等方面的问题才能更好地发挥酶联免疫检测试剂盒的作用。
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标本的采集及保存
1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 (注:标本溶血会影响**检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。)
标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则:临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注意事项
1.用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是加底物溶液及2N 。测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2.洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
注意事项:收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4 ℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时,-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%