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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 检测范围：
电询
- 检测方法：
ELISA
- 应用：
电询
- 适应物种：
电询
- 标记物：
电询
- 样本：
体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥1680.0 |
大鼠白介素16(IL-16)ELISA试剂盒
选择一款合适的酶标板,是ELISA实验成功的 步,然而很多人却忽略了这一点。大家在做实验时往往只考虑实验本身,却不知道产品往往对实验也有很大影响。合适的选择产品,将有助于实验的成功进行。我们在进行ELISA实验的时候通常考虑以下这些因素:
一:孔底的形状:
现在的厂家均将酶标孔设计成独立的柱状,适当地增大孔与孔之间的距离,使之能独立分开,从而 程度地减少交叉污染。不同种类的酶标板其孔底的形状是不同的。以下是一些常见孔底形状:
平底:底部水平,也叫F底。光透过底部不会发生偏折,可以 程度的透光。应用于因可视性或其他原理需要用到圆底的实验。
圆底:也叫U底,提供 的清洗效果以及混合型能,适合需要测试沉淀物的应用。
C型底:介于平底和圆底之间能够提供好的清洗效果,同时结合了平底的优点。
锥型底:又称V底,适用于精准取样以及储存微量样本,以获得 小容量的回收。
二:酶标板的颜色:
酶标板的颜色有三种:透明、黑色、白色。
绝大多数ELISA都选择透明板作为实验材料。白色和黑色的酶标板一般用于发光检测。黑色的酶标板自身会有光吸收,所以其信号要弱于白色的酶标板。黑色的酶标板一般用于检测较强的光,如荧光检测;相反,白色的酶标板可用于较弱的光检测,常用于一般的化学发光和底物显色(如双荧光素酶报告基因分析)。
三:酶标板的材质:
常见的材质有聚乙烯(polyethylene,PE),聚丙烯 (polypropylene,PP),聚苯乙烯(Polystyrene,PS),聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸酯(Polycarbonate,PC)。ELSIA中应用最广的材料是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯质软板薄,可剪割,价格低廉。缺点是光洁度不如聚苯乙烯板,孔底也不如聚苯乙烯平整。但相应的背景值也会有所增加。通常要在酶标板表面进行离子接枝处理,在聚合物表面引入醛基、氨基、环氧基等活性官能团,提高基体表面的性能。
四:不同的结合机理:
包被物质与板底表面的有效结合是ELISA中至关重要的一步。因此,在实验开始前应仔细分析待包被物质的结构特点与化学特性,以选择适当的酶标板。一般来说,包被物质与板底有以下几种结合方式:被动吸附、共价结合和亲和捕获。
被动吸附(Passive Adsorption):被动吸附的机理比较复杂,包被物质与板底之间的结合主要依靠分子间作用力(范德华力)和氢键。在绝大多数ELISA中,包被物质与板底的结合都是依靠被动吸附来完成的。一般来说,中等分子量及大分子量的抗原(或抗体)与板底之间的结合是依靠被动吸附来完成的。在挑选酶标板时通常要考虑板底表面的疏水性/亲水性特征。下表中列出了不同亲水性的板底表面的适用范围及用途:
操作步骤
1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;
3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体 50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗 板 5 次(也可用洗板机洗板)。
6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 所有孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
免责声明
试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或生物体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担, 本公司概不负责。
严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
大鼠白介素16(IL-16)ELISA试剂盒
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文献和实验标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。)
标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注意事项
1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是加底物溶液及2N 。测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
注意事项：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4 ℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本， 将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时，-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
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