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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 检测范围：
电询
- 检测方法：
ELISA
- 应用：
电询
- 适应物种：
人
- 标记物：
电询
- 样本：
血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥1080.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥1896.0 |
人脂联素(ADP)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒预实验设置
一、实验目的
ELISA试剂盒预实验是为了确保实验的准确性和可靠性，验证试剂盒的灵敏度和特异性，同时为正式实验提供参考。通过预实验，可以了解实验条件、操作流程和注意事项，为后续的实验提供指导和帮助。
二、实验原理
ELISA试剂盒是一种基于酶联免疫吸附法的检测方法，通过将特异性抗体或抗原与酶结合，形成酶标抗体或抗原。当待测样本与酶标抗体或抗原发生特异性结合时，酶会催化底物生成有色产物，通过颜色变化来检测待测样本中的抗原或抗体。预实验则是通过调整实验条件，如温度、时间、浓度等，来验证试剂盒的 反应条件。
三、实验步骤
1. 准备试剂和样本
按照试剂盒说明书准备所需的试剂和样本。确保试剂的质量和有效性，同时对样本进行适当的处理和稀释。
2. 设置实验条件
根据预实验的目的，设置不同的实验条件，如温度、时间、浓度等。一般而言，可以通过设置不同的温度、时间和浓度梯度来寻找 反应条件。
3. 实验操作
按照试剂盒说明书进行实验操作。在每个实验条件下，分别进行多次重复实验，以减少误差和提高实验的准确性。
4. 结果观察和记录
观察实验结果，记录每个条件下的吸光度值或颜色变化情况。通过比较不同条件下的结果，可以确定 反应条件。
四、实验结果分析
1. 确定 反应条件
通过对不同条件下的实验结果进行分析，可以确定 反应条件。这些条件包括温度、时间、浓度等。在 反应条件下，酶标抗体或抗原与待测样本中的抗原或抗体能够充分结合，生成的颜色变化 ，从而得到最准确的检测结果。
2. 验证试剂盒的灵敏度和特异性
通过预实验，可以验证试剂盒的灵敏度和特异性。灵敏度是指试剂盒能够检测到的最小抗原或抗体浓度；特异性则是指试剂盒只与特定的抗原或抗体结合，不与其他物质发生交叉反应。在预实验中，可以通过比较不同浓度的标准品或已知样本的检测结果，来评估试剂盒的灵敏度和特异性。
五、注意事项
1. 严格遵守实验操作规程，避免污染和交叉反应。
2. 在使用试剂盒时，要注意试剂的有效期和质量，避免使用过期或质量不佳的试剂。
3. 在实验过程中，要注意观察实验现象，及时记录和整理实验数据。
4. 在分析实验结果时，要结合试剂盒说明书和相关文献资料，进行科学合理的解释和评估。
代理品牌：
| polymersource | 2018加拿大 Polymer Source在定制聚合物业务领 |
| reddotbiotech | 2018加拿大生物试剂公司主要是试剂盒产品 |
| Synthose | 2018加拿大 产品在北美，欧洲和亚洲由 碳水化合物和其他研发化学品的可信赖分销商 |
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| ZEN-BIOSCIENCE | 成都正能生物（ZEN-BIO.cn）成立于2007年，致力于为 生命科学研究机构及生物技术企业研制高品质的抗体产品，从而促进生命科学和人类健康事业的发展！公司科研团队由来自哈佛大学医学院及中国科学院等 科研院所的科学家领军，在科学研究及抗体应用领域具有丰富的经验。公司拥有先进的蛋白研究方法，建成了集工具类蛋白及抗体研发生产为一体的全流程平台,囊括多个 的核心技术。目前公司已获得3项国家发明专利，5项实用新型专利，并有多项发明专利已进入实审。正能生物先后与中国科学院、清华大学、上海交通大学、四川大学等单位建立了深度合作关系，共同发掘研究和疾病相关标志物产品。公司研发生产的蛋白和抗体产品覆盖了现代生命科学研究的各大前沿领域，包括、免疫学、神经科学、干细胞、表观遗传学、与代谢等。现有目录产品12000余种，其中多种产品为 所有。公司于2013年获得国家高新技术企业认证，已建成符合GMP规范的体外诊断试剂生产线。目前已与多家诊断试剂生产企业达成合作，公司开发的诊断试剂原料产品，品质比肩国外 ，适用于免疫类试剂的多种检测平台，获得国内外众多企业的认可。正能生物秉持认真、细致的产品观念，严格控制产品品质。“提供 的抗体产品和技术服务，成为科学界和产业界值得信赖的合作伙伴”是正能不懈的追求！ |
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文献和实验标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。)
标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注意事项
1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是加底物溶液及2N 。测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
注意事项：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4 ℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本， 将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时，-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
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