土壤碱性磷酸酶活性检测试剂盒

土壤碱性磷酸酶活性检测试剂盒
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号: H0490
规格: 50T/48S
产品说明：
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。
产品内容：
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 50mL 蒸馏水充分溶解。试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 1152μL 无水乙醇（自备），48 μL 蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）
标准品：液体 1mL×1 支，0.5μmol/mL 苯酚标准液，4℃保存。
土壤碱性磷酸酶活性检测试剂盒试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯（不允许快递）。
操作步骤：催化反应：
称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4 mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：
1.分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 蒸馏水，100 μL 试剂三，20 μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830 μL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
3.标准管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 标准液，100 μL 试剂三，20 μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830 μL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
4.测定管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 上清液，100 μL 试剂三，20 μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830 μL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
S-ALP活性计算：
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1μmol 酚。
S-AKP/ALP（U/g 土样）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W÷T = 0.725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：0.5μmol/L；V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d。