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文献和实验样品:重组胰蛋白酶,比活 4500USP u/mg pro.,上海雅心生物技术有限公司,纯度如图 1 所示。BAEE,Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE(0.25 mM),分别测定 rPT 纯酶液的活性,最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6),25 mM Tris-HCl (pH 7~8),25
纯以上的试剂。 c. 基准物参加反应时,应按反应式定量进行。 另外,基准物质最好有较大的摩尔质量,这样,配制一定浓度的标准溶液时,称取基准物较多,称量相对误差较小。 常用的基准物质有草酸、氯化钠、无水碳酸钠、重铬酸钾等。 ②标定法:有很多物质(如 NaOH , HCl 等)不是基准物质,不能用来直接配制标准溶液,可按照一般溶液的配制方法配成大致所需浓度的溶液,然后再用另一种标准溶液测出它的准确浓度,这个过程叫做标定,这种配制
性溶液。 ⒎严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用。 二、标准缓冲液的配制及其保存 ⒈pH标准物质应保存在干燥的地方,如混合磷酸盐pH标准物质在空气湿度较大时就会发生潮解,一旦出现潮解,pH标准物质即不可使用。 ⒉配制pH标准溶液应使用二次蒸馏水或者是去离子水。如果是用于0.1级pH计测量,则可以用普通蒸馏水。 ⒊配制pH标准溶液应使用较小的烧杯来稀释,以减少沾在烧杯壁上的pH标准液。存放pH标准物质的塑料袋或其它容器,除了应倒干净以外,还应用蒸馏水多次冲洗,然后将其倒入配制
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