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- 2025年07月08日
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- 文献和实验
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1000
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上海乔羽生物科技有限公司
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文献和实验及试剂 1.电泳仪，垂直电泳槽及其附件，玻璃板，常用实验器材等。 2.玻璃板处理试剂： (1) KOH/甲醇溶液：5gKOH溶于100ml甲醇中，用于清洗玻璃板。 (2) 95%乙醇 (3) 亲和硅烷溶液：95%乙醇 4ml 冰乙酸 20ul 亲和硅烷 20ul (4) 玻璃硅烷：用移液器取适量于短板上，用无尘擦拭纸涂抹均匀。 2.丙烯酰胺溶液45% 丙烯酰胺：43.4克
，7 mol/L 尿素，2% ( W/V ) DTT，4% ( W/V ) CHAPS，2% IPG 缓冲液，pH 3~10 NL，少量溴酚蓝。 ( 10 ) 矿物油。 ( 11 ) 乙醇。 ( 12 ) 冰醋酸 ( 13 ) 亲和硅烷和剥离硅烷。 ( 14 ) 亲和硅烷工作液：8 ml 乙醇，200 μl 冰醋酸，1.8 ml Mlli-Q 超纯水，10 μl 亲和硅烷。 ( 15 ) 40% 丙烯酰胺储液（40% 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺 37
； （2）用1～5V/cm的电压，待溴芬蓝和二甲苯氰FF迁移到适当距离后停止电泳； （3）在紫外检测仪下检测扩增产物，记录电泳结果并照相。 2.7 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 2.7.1 测序凝胶板的制备 玻璃板的处理：银染测序的玻璃板一定要非常清洁。实验过程中，先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高。每次铺胶前均需分别严格处理长玻璃板和短玻璃板。 （1）长玻璃板的处理 a) 用浸透亲和硅烷溶液
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