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- 2025年07月14日
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文献和实验一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
，在提取时需要多次抽提。 如果1-5，7 没有杂带，68有说明是氯仿过多引入杂带（有段时间为了怕酚残留，我的氯仿加入量为0.35体积） 另外从1-4中可以看出是不是由于Trizol不足量导致的杂带残余。 试验结果分析： 1 随着TRIzol的增加，RNA提取出来的质量会更好一些，但是都无法消除最上面的杂带，说明是蛋白残余的可能性比较小。 2 从7号管和常规提取法的5管，以及虽然同样抽提两次，但是加入氯仿过量的6管来看，抽提两次可以有效去除杂带 3 从5，6，8号管来看，氯仿过量会带入
SSC ， 0.1%SDS 的塑料盒内，将盒盖好，置于水平振荡器上，温和振荡 10 min 。 5． 将膜转移至另一含有 100~200ml 预热至 68 ℃、含 0.1%SDS 的 0.5 × SSC 的塑料盒中。 68 ℃下温和振荡 10min 。 6． 重复步骤 5 ，再洗涤至少 2 次，使 68 ℃下共洗涤 3 次。 7． 在印迹纸上晾干膜，然后让膜于 -70 ℃下在含增感屏的暗盒内对 X 线片（ Kodar XAR-5 或相应的胶片）放射自显影 24
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