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RAW264.7+GFP 小鼠
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细胞系
100万
白血病
-
贴壁培养
长期
冻存/复苏
血液,淋巴
上皮细胞样
否
小鼠
RAW264.7-GFP
镜像绮点
T25
细胞描述
此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。
细胞特性
1) 来源:鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞
2) 形态:不规则圆形,纺锤状,贴壁细胞,少量悬浮。
3) 含量:>1x106 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
细胞筛选
该细胞为稳定转染GFP的细胞,随细胞传代次数的增加,其GFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。
初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺,0.11g / L丙tong酸钠) (推荐iCell-0001)培养基;优质胎牛血清10 %;P/S青霉素-链霉素 1%。
2) 注意事项:
(a)在细胞生长的初始阶段,细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。随着培养时间的增加,细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度,会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中,镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。
(b)该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时,用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落,收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。(c)该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时,细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起,有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的,在传代时应收集起来,离心后细胞沉淀可以继续培养。
(d)血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化,应选用高质量的胎牛血清。
3) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
4) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
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