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上海笃玛生物科技有限公司
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血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等
48T/96T
规格: | 48T | 产品价格: | ¥1080.0 |
---|---|---|---|
规格: | 96T | 产品价格: | ¥1896.0 |
人绒毛膜促性腺激素(HCG)ELISA试剂盒
实验原理
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合,通过酶对底物反应的显色反应,对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点,因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了应用。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)ELISA试剂盒
植物样本处理:
植物组织的提取,不管是根茎组织还是叶片组织还是果实组织,都应该采用鲜重的计重方式,一般要遵循以下原则:
1.称取的组织重量不能低于50mg。
2.匀浆的比例按照10%,即1g组织加9ml的匀浆液,匀浆液一般选取PBS(PH=7.2-7.4)
3.组织在匀浆器匀浆过程中,匀浆液应该分2次加进去,这样匀浆更充分。
4.充分匀浆完成后离心取上清,离心机的转数选取2000-3000转每分,转数不宜超过5000.离心时间为15-30分钟。
准备工作
1.孔板室温平衡1小时
2.做好布板图谱
3.样本解冻
4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒
5.准备双蒸水
6.根据样本量配好样本希释液
7.根据样本量及洗板次数配好洗液
8.若需要提前设置好振板器、洗板器
9.准备足够量的擦手纸
10.根据说明书提示,溶解标准品
11.配制不同浓度的标准品
12.配制质控品
13.根据预实验结果稀释样本
14.准备好封板膜
实验步骤
1. 准备:准备好所有试剂、材料和器具。
2. 温育:将包被有特异性抗体的酶标板放入37℃温箱中温育30分钟。
3. 加样:分别向各孔中加入标准品、待测样本,轻轻混匀。
4. 温育:将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。
5. 洗涤:清洗酶标板,除去未结合的抗原抗体。
6. 加酶标二抗:向各孔中加入酶标二抗,轻轻混匀。
7. 温育:将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。
8. 洗涤:清洗酶标板,除去未结合的酶标二抗。
9. 加底物溶液:向各孔中加入底物溶液,轻轻混匀。
10. 显色:将酶标板放入37℃温箱中继续温育15分钟。
11. 终止:向各孔中加入终止液,混匀。
12. 测量:在450nm波长下测量各孔的光密度值(OD值)。
试剂盒组成
试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
说明书 |
1份 |
1份 |
|
封板膜 |
2片(48) |
2片(96) |
|
密封袋 |
1个 |
1个 |
|
酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
标准品:36U/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
说明书 |
1份 |
1份 |
|
封板膜 |
2片(48) |
2片(96) |
操作注意事项
1. 抗原和抗体的储存:应严格按照说明书要求存放抗原和抗体,避免反复冻融和长时间暴露在高温环境中。同时要保证试剂盒未过期,以获得可靠的实验结果。
2. 加样技术:加样时应保证加入的体积准确且不产生气泡,避免加在孔壁的边缘,以免影响与固相表面的接触。加样时应在每孔的旁边放置一个加样对照孔,以监测加样的准确性和重复性。
3. 温育:温育是ELISA实验中的重要步骤,温育时间和温度的控制对于抗原抗体反应的进行和结果的影响至关重要。必须严格按照说明书要求进行温育,并注意保持恒温状态。
4. 洗涤:洗涤是ELISA实验中不可缺少的一步,它可以去除未结合的物质,提高检测的特异性和灵敏度。洗涤时应保证每次洗涤时间充足,并更换洗涤液以保证洗涤效果。同时要避免在洗涤过程中产生气泡,以免影响洗涤效果。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)ELISA试剂盒
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
洗板方法
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
试剂盒会出现的问题及解决办法:
1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶标记物。
解决办法:请按照操作步骤进行。
b.原因:试剂盒内容物未能充分回。
解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因:室温太低。
解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。
d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因:试剂盒已过保质期。
解决办法:请更换成仍在保质期内的试剂盒。
2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。
a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。
解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。
b.原因:操作时间拖太久。
解决办法:请在方法熟练后再进行操作。
c.原因:微孔间相互污染。
解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。
d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。
解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。
e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。
解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。
f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)ELISA试剂盒
3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因:室温太高(>25℃)。
解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。
b.原因:底物溶液受到污染。
解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。
c.原因:反应时间超过太久。
解决办法:请控制反应时间。
d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。
解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)
4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。
a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。
解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。
b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。
解决办法:请参考2-f.
c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。
解决办法: 请参考2-d.
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