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- DUMABIO
- 上海
- DM-AO1069
- 2025年11月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6个月
- 保存条件：
2-8°
- 库存：
999
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 规格：
100管/96样
花青素还原酶（anthocyanidin reductase，ANR）试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
花青素还原酶是黄酮合成途径中的关键酶，在植物体内起非常重要的调控作用，对花青素还原酶的调控机制研究有利于从基因水平改变植物的品质。
测定原理
花青素还原酶在NADPH存在的条件下作用于飞燕草色素转变为表没食子儿茶素和NADP，使反应体系在340nm处的吸光值下降，吸光值下降速率反应了花青素还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
酶液提取
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 培养液等液体：直接检测。
测定操作表
|
试剂名称 |
测定管 |
|
试剂一（μL） |
150 |
|
试剂二（μL） |
10 |
|
酶液（μL） |
20 |
|
试剂三（μL） |
10 |
|
试剂四（μL） |
10 |
充分混匀，于微量石英比色皿/96孔板测定340处吸光值A1，然后在40℃温育20min后，再测定340nm处吸光值A2，△A=A1-A2
酶活性计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫克蛋白每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
= 80.39×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每克组织每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
= 80.39×ΔA÷W
（3）按液体体积计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫升液体每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T
= 80.39×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，20min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫克蛋白每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
= 160.78×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每克组织每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
= 160.78×ΔA÷W
（3）按液体体积计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫升液体每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T
= 160.78×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，20min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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文献和实验芥菜型油菜种皮转录组De Novo拼接及类黄酮生物合成基因的鉴定
了黄籽的荠菜 型油菜中没有PA的积累。 Figure 8. Unigenes involved in the flavonoid biosynthesis pathway in seed coat of Brassica juncea. Abbreviation: ANR, anthocyanidin reductase; CHS, chalcone synthase; CHI, chalcone isomerase; DFR, dihydroflavonol
亦称花青素。是在植物色素中，能使花与果实呈现红、蓝、紫和紫黑等颜色，使紫苏叶呈红紫色和红甘蓝呈红色的一类色素的总称。花色素类最初是由 L． C． Marguart（ 1835）在处理矢车菊的蓝色花时所命的名（希腊语 anthos花 cyanos青），由于这一类色素的主要色素部分（花色素 anthocyanidin）和其他类黄酮同样以与糖结合的配糖体（花青素苷 anth- ocyanin）的形式表现出来的，所以把此配糖体与糖苷配基（ aglycone）合称为花青素类。
Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆
蛋白的结合将报告蛋白的两个片段连在一起，从而使报告蛋白具有可以检测的功能。例如，以鼠二氢叶酸还原酶（mDHFR) 作为报告蛋白，在大肠杆菌中利用简单的存活选择实验进行文库筛选的方法已经建立起来[ 32] 。与在所有的原核和真核细胞中相同，在大肠杆菌中，DHFR 的产物四氢叶酸是合成胸腺嘧啶、甘氨酸、丝氨酸和腺嘌呤所必需的，在原核生物中，它还是合成泛酸所必需的。因此，在不提供 DHFR 终产物的条件下，DHFR 的活性显然对于细胞生长和分裂是不可缺少的。用甲氧苄氨嘧啶（trim ethop rim，叶酸
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