Omipalisib (GSK2126458, GSK458

生物活性产品描述 Omipalisib (GSK2126458, GSK458)是一种高选择性的，有效的p110α/β/γ/δ， mTORC1/2抑制剂，Ki分别为0.019 nM/0.13 nM/0.024 nM/0.06 nM和0.18 nM/0.3 nM。Phase 1。 靶点 p110α [1] p110δ [1] p110γ [1] p110β [1] mTORC1 [1] mTORC2 [1] IC50 0.019 nM(Ki) 0.024 nM(Ki) 0.06 nM(Ki) 0.13 nM(Ki) 0.18 nM(Ki) 0.3 nM(Ki) 体外研究 GSK2126458有效抑制人类癌细胞中发现的p110α(E542K, E545K, 和H1047R)常见激活突变型，Ki 分别为 8 pM, 8 pM 和 9 pM。GSK2126458作用于T47D和BT474 细胞，显著降低pAKT-S473水平，IC50分别为 0.41 nM 和 0.18 nM。 而且, GSK2126458作用于多种细胞系，包括T47D 和 BT474乳腺癌细胞系，导致细胞周期停在G1期，且抑制细胞增殖，IC50分别为3 nM 和2.4 nM。[1] 体内研究 GSK2126458作用于BT474人类移植瘤模型，降低pAKT-S473水平，这种作用存在剂量依赖性，按300 μg /kg低剂量处理抑制肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性。此外, GSK2126458 作用于四种临床前期物种(小鼠, 大鼠,犬 ,和猴 )，具有低血液清除力和良好口服生物有效性。[1] 特征 推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性) 激酶实验: [1] 体外均相时间分辨荧光技术（HTRF）测定 PI3K 抑制 在384孔聚丙烯母板上，化合物 (3倍溶于100% DMSO) 从1列到12列，和13列到24列连续稀释，获得11种浓度 GSK2126458。6列和18列只含DMSO。滴定后，0.05μL 立即转移到384孔低容量实验板上。 实验板中含3种药物对照(PI3K 抑制剂)和3组实验对照: (1) 不含抑制剂的酶实验;(2) 去酶buffer, 和 (3)去酶加 PIP3的buffer。DMSO加到6列和18列的所有孔中。40 μM PIP3加到 1X 反应 buffer (1μL 200 μM PIP3)中， 交替 18列的行数 ( B, D, F, H, J, L, N, P)。不含酶的对照实验在 A, C, E, G, I, K, M, O孔中 (0.1μL 100% DMSO)中进行。使用 HTRF试剂盒优化PI3K 实验 。实验试剂盒中含7种试剂: 1) 4X 反应Buffer; 2) PIP2 (底物); 3) Stop A (EDTA); 4) Stop B (生物素-PIP3); 5) 检测混合物A (链霉亲和素-APC); 6)检测混合物 B (Eu-标记的抗-GST抗体和 GST标记的 PH域); 7) 检测混合物 C (KF)。通过使用去离子水按1:4稀释而制备PI3K反应 Buffer。加入新鲜制备的 DTT，终浓度为5 mM。加入酶，使用Multidrop Combi 在1X反应 buffer中加入2.5μL PI3K，加到每孔中 ，开始预温育化合物。实验板在室温下温育15分钟。 使用Multidrop Combi，加入 2.5μL 2X底物溶液(PIP2和 ATP，溶于 1X 反应buffer)开始反应。实验板在室温下温育1小时。 使用Multidrop Combi在所有孔中加入2.5μL 终止液 (Stop A和 Stop B按5:1比例预混合)，反应淬灭。使用Mulitdrop Combi(检测混合物 C, 检测混合物 A,和检测混合物 B 按18:1:1比率混合，即: 6000 μL 总体积, 混合 5400 μL 检测混合物 C, 300μL 检测混合物 A, 和 300 μL 检测混合物 B)在所有孔中加入2.5μL 检测液，进行淬火反应，检测形成的产品。备注:这种溶液在使用前2小时制备。在暗中温育1小时后，在Envision 酶标仪上测量HTRF信号，在330nm 处测定激发光，在620nm (Eu) 和665nm (APC)处双重发射光。 细胞试验: [1] 细胞系 BT474, HCC1954 和 T-47D 浓度 0 到 1 μM 处理时间 72 小时 方法 BT474, HCC1954 和 T-47D(人类乳腺)培养在含10%胎牛血清的 RPMI-1640 培养基中，培养在37oC下含 5% CO2的 孵育器中。在实验前2到3天，细胞按密度分到T75 烧瓶中，这样在实验收集时获得约70-80% 细胞汇合。使用0.25% 胰蛋白酶-EDTA收集细胞。在细胞悬液中使用台酚蓝染色排除染色，进行细胞计数。细胞按每孔1000个细胞接种在384孔黑色平底聚苯乙烯板中， 每孔含48 μL 培养基。所有实验板置于5% CO2, 37oC 下过夜，第二天加入 GSK2126458。使用CellTiter-Glo处理一个实验板，用于第一天测量。GSK2126458 在清澈见底的聚丙烯384孔板中制备，连续稀释两倍。4 μL 这些稀释液加到105 μL 培养基中混合溶液后, 细胞板的每孔中加入2 μL这些稀释液。所有孔中的 DMSO 终浓度为0.15%。细胞在37oC, 5% CO2 环境中温育 72小时。随后与 GSK2126458温育72小时。CellTiter-Glo试剂加到实验板中，使用与孔中细胞培养体积相当量的体积。震荡实验板约2分钟，在室温下温育约30分钟，然后在Analyst GT 读数器上读取化学分光信号。 动物实验: [1] 动物模型 在小鼠体内移植BT474肿瘤 配制 GSK2126458 溶于DMSO，然后在水中稀释 剂量 ≤300 μg /kg 给药处理 口服处理 溶解度 1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80 18 mg/mL * 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的，可能会和文献中提供的溶解度有所差异，这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。 不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南） 小鼠 大鼠 兔 豚鼠 仓鼠 狗 猴 狒狒 重量 (kg) 0.02 0.15 1.8 0.4 0.08 10 3 12 体表面积 (m2) 0.007 0.025 0.15 0.05 0.02 0.5 0.24 0.6 Km 系数 3 6 12 8 5 20 12 20 动物A (mg/kg) = 动物B (mg/kg) × 动物B的Km系数 动物A的Km系数 例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将22.4 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2 mg/kg。 大鼠剂量 (mg/kg) = 小鼠剂量 (22.4 mg/kg) × 小鼠的Km系数(3) = 11.2 mg/kg 大鼠的Km系数(6) 1 参考文献 [1] Knight SD, et al. ACS Med. Chem. Lett. 2010, 1 (1), 39–43. [2] Greger JG, et al. Mol Cancer Ther. 2012, 11(4), 909-920. Clinical Trial Information( data from http://clinicaltrials.gov) NCT Number Recruitment Conditions Sponsor /Collaborators Start Date Phases NCT01725139 Recruiting Idiopathic Pulmonary Fibrosis GlaxoSmithKline March 2013 Phase 1 NCT01248858 Terminated Cancer GlaxoSmithKline December 2010 Phase 1 NCT00972686 Active, not recruiting Solid Tumours GlaxoSmithKline November 2009 Phase 1 化学数据点击下载Omipalisib (GSK2126458, GSK458) (SDF格式文件) 分子量 505.5 化学式 C25H17F2N5O3S CAS号 1086062-66-9 稳定性 3年 -20℃粉状 6个月-80℃溶于溶剂 别名 N/A 溶解性 (25°C) * 体外 DMSO 100 mg/mL (197.82 mM) 水 <1 mg/mL (<1 mM) 乙醇 <1 mg/mL (<1 mM) 体内 1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80 18 mg/mL * <1 mg/ml 指产品微溶或不溶 * 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的，可能会和文献中提供的溶解度有所差异，这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。 . Chemical Name 2,4-difluoro-N-(2-methoxy-5-(4-(pyridazin-4-yl)quinolin-6-yl)pyridin-3-yl)benzenesulfonamide 制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg 1 mM 1.9782 mL 9.8912 mL 19.7824 mL 5 mM 0.3956 mL 1.9782 mL 3.9565 mL 10 mM 0.1978 mL 0.9891 mL 1.9782 mL 50 mM 0.0396 mL 0.1978 mL 0.3956 mL 摩尔浓度计算器 稀释计算器 分子量计算器 Research Area 客户使用Selleck产品的实验数据(3) 点击放大 Dose response curve of compound on melanoma cell lines. Compound was dissolved in DMSO, added in a 5-fold dilution series, starting with 10 μM, and incubated for 72 hours. Fluorescence was measured after 8 hours incubation in resazurin. Data was normalized to DMSO (maximal viability) and Doxorubicin (minimum viability). 评级 数据来源于 One customer. Omipalisib (GSK2126458, GSK458)购于Selleck 方法 Cell growth inhibition assay 细胞系 Melanoma cell lines 浓度 0.00000512-10 μM 处理时间 72 h 结果 GSK2126458 treatment inhibited Melanoma cells growth in a does-dependent manner