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100
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上海远慕生物科技
- 规格:
250g
货号:YM-BG00235
保质期: 24个月
供应支原体肉汤培养基(不含琼脂和酚红)【培养基配制】
先计算所需培养基之份量 (体积),依已商品化培养基产品上之指示称取所需克数,并加入蒸馏水。
1)搅拌均匀后,于微波炉中加热数分钟将所有成份溶解后
2)利用分注器进行分装(切勿锁紧盖子!)。接著放入杀菌釜中进行灭菌工作
3)若是配制slant 则需于灭完菌后趁 培养基未凝固前锁上盖子并斜放 (可用厚书辅助);若是配置broth或deep agar 可等其冷却后再锁紧盖子,并放入4℃冰箱中保存备用。
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供应支原体肉汤培养基(不含琼脂和酚红)【培养基种类与基本成分】
1)氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
2)碳水化合物是细胞生长主要能量来源,其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
3)培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外,通过提供钠、钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素,细胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。
4)大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。 HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。
5)在细胞培养中,尽管血清是维生素重要来源,但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
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文献和实验配方中都含有苯酚红。若有支原体生长时,会使培养基 pH 值下降或上升,所以培养基颜色变黄 (支原体肉汤培养基) 或变红 (精氨酸支原体肉汤培养基)。19、支原体培养基基础这个含有精氨酸和不含精氨酸的有什么区别,我们想要一种广谱的支原体培养基,建议是用含精氨酸的还是不含精氨酸的?答:广谱支原体培养基就不能用含有苯酚红的培养基,可以用支原体半流体培养基或支原体琼脂培养基。20、支原体培养基基础是添加马血清,青霉素那些还是支原体添加剂啊?答:支原体培养基基础中不含马血清和青霉素,需在基础培养基高压
表面。 (4)电镜检测 若条件许可,可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48~72小时,细胞接近汇合前,用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行。需经过固定、包埋、切片后才能进行观察。详细方法同细胞形态观察法(见第九章)。 (5)培养检测 将2.5×109/L细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基(Sigma或北京生物制品所生产的均可),培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀,然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中,再用琼脂培养基做分离培养,37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。 污染的清除和预防
性状分为固体、半固体和液体三种。 实验目的: 了解常用的液体、固体、半固体培养基的成分、制备方法和用途。 实验材料: 牛肉、蛋白胨、氯化钠、琼脂 、0.1mol/lNaOH溶液、酚红指示剂、蒸馏水等。 实验方法: 一、肉汤培养基 1、 将鲜牛肉除去筋膜和脂肪,切成小块后用绞肉机绞碎,以每500g碎牛肉加1000ml蒸馏水的比例混合后,置4℃冰箱过夜。 2、 次日取出浸泡物倒入容器内煮沸半小时,使肉渣凝固
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