Ph.D™.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2

Ph.D™.-12 Phage Display Peptide Library Kit v2
Ph.D™.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2

噬菌体展示是一种筛选技术，可将一系列多肽或蛋白展示在噬菌体病毒颗粒的表面，而编码这些多肽或蛋白的遗传物质位于病毒颗粒的内部（1-3）。这在各展示蛋白序列与其编码 DNA 之间产生了物理关联，从而能够通过称为淘选（4）的体外筛选流程，快速筛选出与给定目标分子（抗体、酶、细胞表面受体等）亲和结合的噬菌体展示肽。最简单的淘选流程（图 1）：将展示不同肽的噬菌体库与包被在平板（或磁珠）上的靶分子进行温育，洗掉未结合的噬菌体，再洗脱特异性结合的噬菌体，然后扩增洗脱的噬菌体，并重复上述结合/扩增过程，富集表面展示有与靶分子结合的肽序列的噬菌体。经过 3–4 轮淘选后，通过 DNA 测序和结合试验得到表征单个克隆。

Ph.D.-12 噬菌体展示肽库试剂盒 v2 的制备原理是将随机十二肽组合库融合表达于 M13 噬菌体次要外壳蛋白（pIII）的 N 端（5-9）。这种肽后跟随一个直接位于野生型 pIII 序列之前的短间隔序列（Gly-Gly-Gly）。该库包含约 10 亿个电穿孔序列，在提供的 10 μl 噬菌体中经扩增一次，每个序列即可产生约 100 个拷贝。

展示肽形式：X₁₂-GGG-野生型 M13 pIII

图 1：对 pIII 上展示的五价肽库进行淘选。

• 试剂盒组成

  本产品提供以下试剂或组分：

  

  优势和特性

• Features

  • 即用型复杂噬菌体库；表型与基因型之间的内在关联支持在单个微孔板或 Eppendorf 试管中筛选数十亿个克隆
  • 对照淘选实验无需执行封闭步骤，可避免噬菌体与塑料结合物发生非特异性结合
  • 使用 Protein G 磁珠进行对照淘选实验，可减少繁琐的板/孔冲洗步骤
  • 随机区域的长度（12-mer）便于形成分子内二级结构，并在结合位点之间留出序列间隙
  • 无需使用辅助噬菌体进行扩增
  • 利用简单明了的分子生物学和无菌培养技术，可在不到一周的时间内获得肽结合序列
  • 提供的 -96 gIII 测序引物（500 pmol）可进行 50 次以上测序反应
     
     

• 注意事项

  1. 若要长期贮存（> 30 天）E. coli K12 ER2738，推荐贮存于 -80℃。
  2. Protein G 磁珠应贮存于 4℃，以防冻坏。
  3. 初代试剂盒（NEB #E8110）和二代试剂盒（简称 v2；NEB #E8210）均包含相同的 Ph.D.-12 噬菌体展示肽库组份（NEB #E8111）。
  4. M13 兼容大多数缓冲液条件；不过，洗脱缓冲液可能受制于扩增大肠杆菌所需的培养条件。如果使用二代测序方式，则无需通过扩增来富集噬菌体池。浏览现有文献了解操作流程。
  5. 提供的 -96 gIII 测序引物（500 pmol）可进行 50 次以上测序反应。

• 参考文献

  1. Sidhu, S.S. (2000). Curr. Opin. Biotechnol.. 11, 610-616.
  2. Rodi, D.J. and Makowski, L. (1999). Curr. Opin. Biotechnol. . 10, 87-93.
  3. Wilson, D.R. and Finlay, B.B. (1998). Can. J. Microbiol.. 44, 313-229.
  4. Parmley, S.F. and Smith, G.P. (1998). Gene. 73, 305-313.
  5. Scott, J.K. and Smith, G.P. (1990). Science. 249, 386-390.
  6. Whaley, S.R. et al. (2000). Nature. 405, 665-668.
  7. Noren, K.A. and Noren, C.J. (2001). Methods. 23, 169-178.
  8. Rozinov, M.N. and Nolan, G.P (1998). Chem. Biol.. 5, 713-728.
  9. Rodi, D.J. et al. (1999). J. Mol. Biol.. 285, 197-203.